单增李斯特氏菌快速检测方法的建立.pdf

2012年9月食品研究与开发
第33卷第9期检测分析
134FoodResearchAndDevelopment

单增李斯特氏菌快速检测方法的建立

刘旸1，张海英1，刘国红1，张宏伟1,2，张霞1,2,*
（1.天津出入境检验检疫局，天津300461；2.天津科技大学，天津300457）

摘要：建立单增李斯特氏菌的快速检测方法。针对单增李斯特氏菌virR基因序列设计特异性引物及探针，建立等
温扩增法，并利用免疫金标试纸条对结果进行检测。用10株单增李斯特氏菌、6株李斯特菌属菌株及其他食源性致
病菌24株进行特异性试验；通过定量DNA、纯菌液计数进行灵敏度验证。结果表明建立方法具有较好的特异性；增
菌液检测灵敏度为102cfu/test，DNA检测灵敏度为100pg/test。建立的单增李斯特氏菌的快速检测方法特异性较好、灵
敏度高，适合于单增李斯特氏菌快速筛选检测。
关键词：单增李斯特氏菌；快速检测；等温扩增

RapidDetectionofListeriaMonocytogenes
LIUYang1,ZHANGHai-ying1,LIUGuo-hong1,ZHANGHong-wei1,2,ZHANGXia1,2,*
（1.TianjinEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Tianjin300461,China;2.TianjinUniversityofScience&
Technology,Tianjin300457,China）
Abstract：ToestablishanewrapidmethodfordetectionofListeriamonocytogenes.Onthebasisofsequence
analysisoftheListeriamonocytogenesvirR,specificprimersandprobeweredesigned,wedevelopedisothermal
amplificationmethod,usingtheimmuno-goldstandardteststriptotestresults.Thespecificityofthemethodwas
evaluatedby10strainsofListeriamonocytogenes,6strainsofListeriaand24strainsoffoodbornepathogens.
ThesensitivityofthemethodwasevaluatedbytestingthequantitativeDNA,purebacteriacounted.Themethod
establishedinthisarticleisspecificandsensitive.Thelimitofdecetionis100pg/testforthegenomicDNA,
102cfu/testforpurebacterialculture.Themethodwassensitive,specific.Itwassuitableforrapidscreening
Listeriamonocytogenes.
Keywords：Listeriamonocytogenes;rapiddetection;isothermalamplification

单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）及畜牧业的生产带来严重的威胁，所以建立快速准确
（L．mon）简称单增李斯特氏菌，是一种重要的人兽共患的检测方法是保证食品卫生安全和有效防治本病的
病病原体，感染人和多种动物，引起人和动物脑膜炎、重要手段。
败血症、流产等症状。该菌也是一种最为常见的食源目前对该菌的检测主要有分离培养方法、免疫学
性病原菌，WHO将其列为20世纪90年代食品中四大方法[4]及PCR方法[5]等。分离培养法操作步骤繁琐，检
致病菌之一。它在自然界中分布广泛，4℃的环境中仍测周期长，一般需要5d～7d完成，不能满足快速检测
可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌的要求[6]，免疫学方法具有操作简单，检测通量大的优
之一，极易污染食品而引起食物中毒和李氏杆菌病的点，但是由于该菌与同属异种菌具有交叉抗原，免疫
暴发，尤其是在欧美国家经常发生[1-3]，给人类的健康学方法不能进行李斯特氏菌种间特异性鉴定[7]，而且
检测结果容易受多种因素影响，容易出现假阳性，不
基金项目：国家质检总局科研项目（2011IK241）
能满足检测的要求。PCR方法具有特异性强、灵敏度
作者简介：刘旸（1978—），男（汉），工程师，本科，研究方向：食品
高等特点，但这类方法通常检测成本高，需要比较昂
安全。
贵的仪