大豆异黄酮含量的测定-高效液相色谱法（国家标准编制说明）.doc

大豆异黄酮含量的测定
国家标准编制说明
一、工作简况
（一）任务来源
本标准为2007年全国粮油标准化技术委员会下达的制定标任务，计划编号为20071119-T-469。由全国粮油标准化技术委员会归口，本国家标准的制订工作由黑龙江省出入境检验检疫局于2007年提出申请，由黑龙江省出入境检验检疫局和九三粮油工业集团有限责任公司负责研究和起草。
（二）制定本标准的目的和意义
大豆异黄酮是一类从大豆中分离的主要活性物质，是一类含有多个酚羟基的多酚化合物的总称，目前发现的大豆异黄酮共有12种（见图1）：大豆黄素(Daidzein)、染料木素(Genistein)、大豆素（Daidein）及其相应的糖苷。研究表明，其中异黄酮苷元被认为是大豆生物活性物中最具有医疗价值的活性成分，包括抗肿瘤、抗氧化和保护心血管作用，能够缓解和减轻女性更年期不适症状，改善骨质疏松等作用。

图1大豆异黄酮的结构式
由于大豆异黄酮具有显著的医疗保健作用，近年来在食品、医药等行业被广泛应用，以大豆异黄酮开发的产品在我国保健品行业中逐渐增多。由于大豆异黄酮随着大豆及其制品在生产加工过程中加工方法或提取方法的不同，种类和含量也发生改变，对于大豆异黄酮种类和含量的检测，国家目前尚未制定统一的标准。因此，为了使大豆异黄酮含量的测定方法标准适用性更广泛，使企业和流通领域在执行标准的过程中更加便于操作，建立一种专属和灵敏的测定各种异黄酮化合物的方法具有重要的意义。
（三）主要起草人及工作简况
《大豆异黄酮含量的测定》国家标准的制定由全国粮油标准化技术委员会总负责。本标准的研制工作由黑龙江出入境检验检疫局和九三粮油工业集团有限责任公司共同承担完成，起草组主要成员有：高勇、王乐、刘雨奇、……等，负责本标准制定的各项工作。在标准的编制过程中，起草组成员之间多次通过电话、电子邮件等形式就标准中的问题进行沟通和探讨。本标准的研制过程主要分为资料收集、课题研制和标准编写阶段。主要工作过程分述如下：
1、资料收集和研究计划制订：通过搜索互联网、查阅文献资料等手段收集当前国内外有关大豆异黄酮含量的测定的各种规范、标准和文献。结果为目前国内还没有有关大豆异黄酮含量测定的各种规范和标准。
2、课题研制阶段：通过课题组集中讨论的方式确定标准制定原则及基本框架，进行了大量细致和深入的实验研究，总结实验结果编制成标准的草稿。
3、根据GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》、GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的规定进行本国家标准的编制工作，组织部分食品生产和食品监督检验领域的专家对标准初稿进行审阅，根据审阅意见进行修订。经过审阅和修订过程，形成“工作组征求意见稿”。
二、标准编制原则及主要内容
（一）标准编制原则
按全国粮油标准化技术委员会关于粮油检验方法标准的编制指导思想及原则作为本标准的编制原则。新标准要适应建立社会主义市场经济体制和粮食流通体制改革的总体要求以及我国加入世界贸易组织的需要。为市场服务，为企业服务，逐步建立健全粮食流通标准体系。制、修订国家标准要有利于促进产业升级和产品结构的调整、推动技术进步和技术创新、推动与国际惯例接轨。
（二）编制依据和本标准主要内容
本标准遵循GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的编写规则。
本标准的主要内容有范围、规范性引用文件、原理、试剂与材料、仪器、测定步骤、计算和大豆异黄酮标准液相色谱图。
（三）新旧国家标准水平对比
目前没有国家标准。
（四）本标准的技术路线
本标准起草工作组查阅了大量国内外与异黄酮含量测定方法相关的资料，对三种固体大豆及其制品中异黄酮的含量进行了测定，优化了样品前处理方法和高效液相色谱的仪器工作条件，对线性范围、回收率和精密度等相关指标进行了检测。
三、实验结果与分析
实验样品与标准样品：
本次实验样品为大豆、豆奶粉、豆豉三种。
本实验的大豆异黄酮标准样品分别为：①大豆甙(Daidzin)纯度≥98%（来源：Sigma公司），②染料木甙(Genistin):纯度≥99%（来源：Fluka公司），③大豆黄素(Daidzein)：纯度≥98%（来源：Sigma公司），④染料木素(Genistein)：纯度≥98%（来源：Sigma公司），⑤黄豆黄素（Glycitin）：纯度≥98%（来源：Wako公司），⑥黄豆黄素甙元(Glycitein)：纯度≥98%（来源：Wako公司）。
样品前处理方法的研究
为了尽可能多地将大豆及其制品中含有的大豆异黄酮提取出来，做到损失少，提取后残留量低，更加接近真实值，对样品前处理方法进行了研究。
1．NaOH