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抗弓形虫单克隆抗体的制备及夹心ELISA方法的建立的综述报告
引言：
弓形虫病是由弓形虫（Toxoplasmagondii）引起的一种人畜共患的寄生虫病。在全球范围内已经成为重要的公共卫生问题。在自然界中，猫是弓形虫的终宿主，而家畜和人则是中间宿主。人与动物摄入含有弓形虫孢子的食物或水，或经接触含弓形虫孢子的土壤、粪便、尘土等而感染。由此，导致生殖、神经和心脏系统等疾病。传统的疫苗和控制方法并不能有效控制弓形虫病的传播和治疗，因此，研发和建立有效的检测方法成为治疗和预防这一疾病的关键。其中，抗体检测是弓形虫病的主要检测方法之一。
近年来，夹心ELISA法在抗体检测方面被广泛应用。其优点是灵敏度高、易操作，并且可以同时进行大量样品检测。本文就抗弓形虫单克隆抗体的制备及夹心ELISA方法的建立进行阐述和综述。
一、抗弓形虫单克隆抗体的制备：
制备抗弓形虫单抗需要经历以下几个步骤：
1.提取抗原：用0.85%的氯化钠溶液对含有弓形虫的细胞进行洗涤；在6mol/L的尿素/10mM的Tris-HClbuffer中进行萃取和叶片震荡，离心和取上清液
2.制备多克隆抗体：抽血，离心，取清液，免疫小鼠腹腔，注射次数不少于三次。收切腹腔液，纯化后进行酶联免疫吸附试验。最终选出产物较好的小鼠进行肝脾摘除。
3.制备单克隆抗体：将获得多克隆抗体的小鼠死亡后，取其脾脏，对其进行细胞海绵体铵离子溶解操作采取细胞融合技术进行杂交瘤制备。
对比这两种方法，制备单克隆抗体的精度更高，能区分特异性更高的弓形虫抗原，但步骤较多且需要较为专业的技术。制备多克隆抗体相对简单但精度稍低。
二、夹心ELISA法：
夹心ELISA法通过在固相基质上捕获抗原或抗体，分析样本中的特定抗体或抗原。该法以ELISA板为基质，在其中加入特定浓度的抗原和抗体，在样品加入和反应后，将其洗去并加入标记ABTS（2,2-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid））底物以加速反应。该方法的灵敏度高且最大化降低了假阴性和假阳性的风险。
三、抗弓形虫单克隆夹心ELISA的建立：
1.筛选细胞：将摘出的脾细胞与骨髓细胞融合，进行供试靶细胞筛选，直至找到满意的克隆。
2.制备抗体：将筛选到的单克隆细胞体内的抗体进行纯化和加工，制备成抗体。
3.确定最佳配对和诊断表现：合理构建夹心ELISA试剂盒，确定最佳配对抗体，确定试剂盒有效的检测浓度范围和最佳的检测参数，选取满足要求的阈值，建立诊断表现。
4.检验试剂盒效力和检测样本：利用大量的检测样本评价试剂盒的性能和效力，包括灵敏度、特异性和精度等。
结果分析表明，利用抗弓形虫单克隆体制备的夹心ELISA对弓形虫病的检测灵敏度较高，特异性强，且能够较好地检测出患有弓形虫病的患者的抗体水平，具有重要的应用价值。
结论：
抗爆形虫单克隆抗体的制备及夹心ELISA方法的建立具有一定的难度，但是它们在检测弓形虫病上具有显著的优势。当它被广泛应用于临床实践时，将有望为患者的诊断和治疗提供更准确、可靠和有效的支持，为弓形虫病的控制和预防做出贡献。