BJS201705食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定.doc

附件1

食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定
BJS201705
范围
本方法规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的高效液相色谱-串联质谱的测定方法。
本方法适用于液体乳、稀奶油、婴幼儿配方乳粉（不包括特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉）、婴幼儿谷类辅助食品、谷物碾磨加工品、植物油脂等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定。
原理
样品经乙腈提取后，再以正己烷除脂净化，高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，外标法定量。
试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
试剂
甲醇（CH4O）：色谱纯。
乙腈（C2H3N）：色谱纯。
甲酸（CH2O2）：色谱纯。
正己烷（C6H14）：色谱纯。
氯化钠（NaCl）：在550℃灼烧4h后备用。
0.1%甲酸水溶液：量取10mL甲酸并加入水定容至1000mL。
标准品
香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素标准品纯度≥98.0%，中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量和结构式等信息详见附录A表A.1。
标准溶液配制
标准储备液（1.00mg/mL）：分别称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素0.1g
（精确至0.0001g）标准物质于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度。避光于-18℃下保存，保存期为6个月。
混合标准储备溶液：分别吸取上述三种标准储备液1.00mL于同一100mL容量瓶中，用乙腈
稀释到刻度配制成浓度为10μg/mL的混合标准储备溶液，避光于-18℃保存，保存期为1个月。
空白基质溶液：按照6.1规定的前处理方法操作制备空白基质溶液。
基质混合标准系列工作液：分别准确吸取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准储备
液适量(3.3.2)，用空白基质提取液（3.3.3）将其稀释为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL标准系列工作溶液，临用时配制。
仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。
涡旋混合器。
超声波清洗器。
离心机：转速≥5000r/min。
分析天平：感量0.1mg和0.01g。
试样制备
婴幼儿谷类辅助食品、谷物碾磨加工品需粉碎混匀，使其全部可以通过425μm的标准网筛；其它样品无需特殊制备。
分析步骤
样品的制备与提取
婴幼儿配方乳粉、婴幼儿谷类辅助食品：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL水，涡旋振荡30s，加入7mL乙腈（3.1.2），涡旋振荡30s，超声处理25min，10000r/min离心5min后，取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中，加入1mL正己烷（3.1.4），涡旋混合30s，5000r/min离心3min后，取下层清液，过滤膜（0.22μm，有机相），待分析。
液体乳（巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳等）、稀奶油：称取2g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入20mL乙腈（3.1.2），涡旋振荡30s，超声处理25min，加入1g氯化钠（3.1.5），10000r/min离心5min后，取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中，加入1mL正己烷（3.1.4），涡旋混合30s，5000r/min离心3min后，取下层清液，过滤膜（0.22μm，有机相），待分析。
谷物碾磨加工品（大米等）：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL水，涡旋振荡30s，加入7mL乙腈（3.1.2），涡旋振荡30s，超声处理25min，10000r/min离心5min后，取上层清液过0.22μm滤膜（4.6），待分析。
植物油脂：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入1mL水和10mL乙腈（3.1.2），涡旋振荡30s，超声处理25min，加入1g氯化钠（3.1.5），10000r/min离心5min后，取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中，加入1mL正己烷（3.1.4），涡旋混合30s，5000r/min离心3min后，取下层清液，过滤膜（0.22μm，有机相），待分析。
仪器参考条件
色谱条件
色谱柱：XDBC18柱，4.6mm×50mm，1.8m，或性能相当者。
流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：甲醇，梯度洗脱条件见表1。
流速：0.3mL/min。
柱温：30ºC。
进样量：2µL。
表1梯度洗脱条件
时间（min）A相（%）B相（%）075250.5752525050650507109091090127525
质谱条件
离子源：电喷雾离子源。
扫描方式：正离子扫描(ESI+)。
检测方式：多反应监测(MRM)。
离子化电压、雾化气、辅助气、气帘气压力、雾化温度应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对及其他质谱参数见附