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Rhizobiumsp.N613胞外多糖的分离条件优化及基硫酸酯化的研究的中期报告
本研究旨在对Rhizobiumsp.N613菌株分离纯化胞外多糖及其基硫酸酯化的工艺进行优化和研究。以下为研究中期进展的报告：
1.Rhizobiumsp.N613菌株的培养与胞外多糖的分离
通过遗传工程方法构建的Rhizobiumsp.N613菌株已得到成功培养。将菌株培养至对数生长期后，采用超高速离心将菌体分离，并经过多次洗涤去除细胞内的杂物和生长介质。
接着利用无酶颗粒法和超滤法对胞外多糖进行初步分离。在无酶颗粒法中，先将培养物经过急速冷冻处理，使菌体破裂，此时胞内和胞外的多糖混合。将混合液件于无酶颗粒中，利用颗粒的吸附作用分离胞外多糖。在超滤法中，采用不同孔径的超滤膜，通过超滤去除大分子的胞内成分，而小分子的胞外多糖则得到了保留。
2.Rhizobiumsp.N613胞外多糖的纯化与基硫酸酯化
经过上述初步分离后，我们对Rhizobiumsp.N613胞外多糖的纯化过程进行了以下优化。首先采用DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析法，进行离子交换分离。然后进行凝胶过滤层析，实现胞外多糖的分子量分离。最后使用薄层离子交换色谱法，对得到的样品进行最后的纯化和鉴定。经过以上步骤，得到了纯度较高的Rhizobiumsp.N613胞外多糖。
同时，我们也进行了基硫酸酯化反应的研究。将Rhizobiumsp.N613胞外多糖和基硫酸钠混合，经过一定温度和时间的反应，得到了基硫酸酯化的产物。利用红外光谱和核磁共振谱对产物进行了分析，并对反应的参数进行了优化。
综上，本研究已初步完成Rhizobiumsp.N613菌株胞外多糖的分离和基硫酸酯化反应的实验。下一步将进一步对分离纯化过程进行改进，并对胞外多糖和基硫酸酯化产物的生物学活性和应用价值进行研究。