临床免疫分析发展趋势及化学发光技术应用.ppt

临床免疫分析发展趋势及化学发光技术应用-化学发光
-荧光偏振
-微粒子酶放大化学发光
电化学发光
-时间分辨免疫荧光
抗体芯片
透射和散射比浊
流式细胞技术标记免疫学分析技术发展历程放射免疫诊断技术（RIA）方法技术成熟度高
放射性（125I）污染和危害
125I的半衰期短，试剂有效期短
标记物125I的稳定性差，批间、批内的变异较大
标准曲线有效期短，必须每次定标
操作繁琐，出报告时间长
无法保存备用。成本低廉
定性、半定量和定量均可以检测
O.D值在低中浓度范围与酶活性呈线性关系
可以肉眼简单判读或酶标仪准确判读结果
灵敏度高，检测低限达10-19mol
测定范围宽，可达9个数量级
自动化程度高，操作简单
试剂稳定性好，无污染有效期6－24月
BAYERACS180最先进的免疫学分析技术之一
非开放性试剂系统；
试剂价格过高免疫学检验技术发展趋势

简史：本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。
原理：发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与催化的酶的量成正比,由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量.
CLIA试剂盒国产化程度已经较高，质量与国外产品的差距逐渐减小。
缺乏国产化的自动检测仪器发光检测方法分类和对比【化学发光免疫分析种类】原理图【化学发光免疫分析种类】2、酶促化学发光或持久发光
原理：酶促化学发光一般是将碱性磷酸酶（AP)或辣根过氧化物酶(HRP)标记在抗体或抗原上，固相抗体或抗原与AP或HRP标记的抗原、抗体复合物在发光底物AMPPD或Luminol作用下，持续发出可见光，通过光电倍增管读取光信号。
特点：
碱磷酶体系：水解反应，起光较慢，发光强度较弱，灵敏度较高。
辣根酶体系：氧化还原反应，起光较快，发光强度较大。
代表仪器和试剂：
进口品牌：强生VitrosECi（鲁米喏），美国贝克曼公司的ACCESS（AMPPD）。
国产主要厂家：郑州安图（HRP-LUMINOL)、北京源德（HRP-LUMINOL)、泰格可信（HRP-LUMINOL)、科美东雅(AMPPD)、威海威高（HRP-LUMINOL)等VitrosECi（鲁米喏）
原理图3、电化学发光
原理：纳米磁珠分离后的三联吡啶钌标记的抗原抗体复合物，在三丙胺的作用下，发生氧化还原反应，发出可见光，通过光电倍增管进行光子计数，相对光强度RLU与待测抗原浓度成函数关系。
特点：激发发光过程复杂，时间长，每一个发光过程约需25秒，测试速度慢。
代表仪器：瑞士ROCHE公司的ELECSYS1010和ELECSYS2010。电化学发光检测技术（ELECSYS1010ELECSYS2010）
原理图
1结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2++N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的抗-HBs和结合了生物素的抗-HBs与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟
将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、
抗-HBs连接为一体，形成双抗体夹心法
.3蠕动泵将形成的[Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的抗-HBs（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室

4蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程
.5终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定
4、免疫荧光

4.1时间分辨免疫荧光（TRFIA)
美国PerkinElmer
芬兰Wallac
新波
达安基因

4.2光激化学发光（Lica）
博阳

4.3多种技术综合
美国雅培AxSYMMEIA
日本东曹MEIA基本原理
TRFIA是用镧系稀土元素螯合物标记抗体或抗原，检测标本中相应的抗原或抗体，用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。TRFIA