一种食用菌菌种提纯复壮及新品种选育的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106367352A(43)申请公布日2017.02.01(21)申请号201610719727.4(22)申请日2016.08.25(71)申请人河北省科学院生物研究所地址050081河北省石家庄市友谊南大街46号(72)发明人张根伟李书生刘振国付艳菊(74)专利代理机构石家庄新世纪专利商标事务所有限公司13100代理人杨钦祥董金国(51)Int.Cl.C12N1/14(2006.01)权利要求书1页说明书8页(54)发明名称一种食用菌菌种提纯复壮及新品种选育的方法(57)摘要本发明提供一种简便、高效提纯复壮食用菌菌种的方法。食用菌菌种在长期传代过程中，会出现菌种退化，具体表现为菌丝生长慢、抗性减弱、产量下降、菇质差等，显微镜观察可见菌丝细胞壁穿孔、细胞壁不完整等形态学缺陷。本发明利用含有1-40ppm的结晶紫的食用菌试管种培养基培养退化的食用菌菌种，抑制抗逆性差的菌体生长，然后分离生长快的尖端菌丝，筛选锁状联合多而清晰、细胞壁完整、抗逆性强、活力高的菌丝进行出菇试验验证，产量高、品质好、性状符合要求的为提纯复壮的菌株。此外，结晶紫会产生一定的诱变作用，出菇试验中筛选出菇特性、子实体形状发生变异的子实体进行组织分离，进行下一轮的出菇试验验证，可以得到食用菌新品种。CN106367352ACN106367352A权利要求书1/1页1.一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于：利用含有结晶紫的食用菌试管种培养基培养退化的食用菌菌种，然后采用菌丝尖端切割法分离尖端菌丝，转移到常规食用菌试管种培养基中培养，对培养出的菌株进行筛选并进行出菇试验验证，产量、品质及性状符合要求的即为提纯复壮的菌株。2.如权利要求1所述的一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于：所述结晶紫在食用菌试管种培养基中的含量为1-40ppm。3.如权利要求2所述的一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于：所述结晶紫在食用菌试管种培养基中的含量为10-40ppm。4.如权利要求1所述的一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于：所述常规食用菌试管种培养基为PDA培养基、麦芽浸汁培养基或米饭培养基，所述含有一定浓度结晶紫的食用菌试管种培养基是在常规食用菌试管种培养基的基础上添加一定浓度的结晶紫。5.如权利要求1所述的一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于：所述对培养出的菌株进行筛选具体为：筛选以下性状最优的三株菌株：锁状联合多而清晰，细胞壁完整，抗逆性强，活力高。6.如权利要求1-5任一项所述的一种食用菌菌种提纯复壮的方法，其特征在于具体包括以下步骤：（1）制备含有结晶紫的食用菌试管种培养基：首先制备常规食用菌试管种培养基，然后配制结晶紫溶液，将常规食用菌试管种培养基液化，无菌条件下加入结晶紫溶液，摇匀，冷却即得；（2）菌种活化：取待提纯复壮的退化的食用菌菌种试管种，由试管口到底部3-6个不同部位取菌块接入含有常规食用菌试管种培养基的培养皿中，置于20-28℃的培养箱中培养，待菌丝长满培养皿，用无菌打孔器在不同部位打孔3-10个，制备活化的食用菌菌饼；（3）初步提纯复壮：取含有1-40ppm结晶紫的食用菌试管种培养基培养皿，将活化的食用菌菌饼接入培养基中，20-28℃培养，待菌丝生长至培养皿边缘，挑取菌落外缘尖端菌丝，接入食用菌试管种培养基中，即为初步提纯复壮的菌株；（4）初步提纯复壮菌株的筛选：选取锁状联合数量多、均匀、清晰，菌丝浓厚、粗壮、整齐的菌株进行出菇试验；（5）出菇试验：将步骤（4）筛选出的菌株在常规食用菌试管种培养基中活化，接入到食用菌常规栽培料中进行出菇试验，产量、质量、性状符合生产要求的即为提纯复壮的菌株。7.一种食用菌新品种选育方法，其特征在于：在权利要求1-5任一项所述的方法的出菇试验中，筛选出菇特性和/或子实体形状发生变异的子实体进行组织分离，进行下一轮的出菇试验验证，即可得到食用菌新品种。2CN106367352A说明书1/8页一种食用菌菌种提纯复壮及新品种选育的方法技术领域[0001]本发明属于食用菌菌种选育技术领域，具体涉及一种利用含有结晶紫的培养基培养食用菌菌种，使退化的菌株提纯复壮及产生变异新品种的方法。背景技术[0002]中国食用菌栽培历史悠久，食用菌生产和出口均居世界第一。目前，我国80%的农业区域均有食用菌产业项目，在农村产业化调整中承担着重要的作用。食用菌菌种作为发展食用菌的基础生产资料，对食用菌生产起着关键性作用，直接影响产量和质量。然而，食用菌菌种在长期保藏及转代过程中普遍存在生产性能变劣、种性衰退等现象。例如平菇当家品种2026、89、2028、科佳1号等，以及香菇当家品种808、939、L26、L66等，这些优良品种在长期保藏及转代培养过程中