柑桔叶片干旱胁迫抑制差减cDNA文库的构建与初步分析的任务书.docx

柑桔叶片干旱胁迫抑制差减cDNA文库的构建与初步分析的任务书
任务书
标题：柑桔叶片干旱胁迫抑制差减cDNA文库的构建与初步分析
任务背景：
柑桔是我国重要的经济作物之一，由于其较强的适应性和丰富的营养成分，在国内外市场均有很大的潜力。然而，在全球气候变化的背景下，柑桔受到的干旱胁迫逐渐加剧，对柑桔的生长和发育产生了一定的影响。因此，对于柑桔植物对于干旱胁迫的响应机制进行深入研究，对于柑桔生产的提高具有重要的意义。
任务目标：
本次任务旨在构建柑桔叶片干旱胁迫抑制差减cDNA文库，并对文库进行初步分析，挖掘出与柑桔叶片干旱响应相关的基因，为深入研究柑桔对干旱胁迫响应机制提供基础。
任务内容：
1.实验材料准备：
a.柑桔干旱胁迫处理材料（叶片）
b.对照组材料（叶片）
2.总RNA的提取与纯化
a.柑桔干旱处理组和对照组各采集适量的叶片，将其在液氮中淬火后，放入离心管中。
b.加入Lysisbuffer进行细胞破碎。
c.将混合液样液经过酸性酚/氯仿提取法，提取总RNA。
d.通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量，并对RNA进行纯化。
3.构建干旱胁迫抑制差减cDNA文库
a.首先，对干旱处理组和对照组进行聚合酶链反应，并使用两种不同的引物。
b.将干旱处理组的cDNA与对照组的cDNA进行单杂交，消除两者间相同的部分，得到差减cDNA。
c.将差减cDNA插入适当的载体中，并转化到大肠杆菌中。
4.初步分析文库
a.进行菌落PCR，将正确插入差减cDNA的克隆扩增。
b.对克隆进行限制性酶酶切和序列分析。
c.分析差减cDNA序列，挖掘与柑桔干旱响应相关的基因，并进行生物信息学分析和Annotation。
任务时间：
本次任务预计完成时间为2个月。
任务成果：
1.成功构建柑桔叶片干旱胁迫抑制差减cDNA文库；
2.对文库进行初步分析，挖掘出与柑桔叶片干旱响应相关的基因，为未来深入研究柑桔对干旱胁迫响应机制提供基础。
任务人员分工：
a.实验操作人员：完成实验室操作。
b.数据分析人员：完成文库序列分析、数据挖掘、Annotation和生物信息学分析。
c.项目负责人：指导实验和数据分析，对任务完成情况负责。