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食源性致病菌PCR检测策略的建立和优化开题报告
一、背景
食源性疾病是指人体因食用了受到污染的食物或饮用水，而导致疾病的一类感染性疾病。食源性疾病不仅严重危害人体健康，还给社会和经济带来巨大损失。据统计，仅在中国，每年就有超过2000万人患上食源性疾病，其中死亡人数更是不容忽视。为保障公众健康，保证食品安全，建立快速、准确的检测方法显得尤为迫切。
在目前人类已知的食源性致病菌中，Salmonella、Listeria、Campylobacter、Escherichiacoli（E.coli）等在食品安全中占据着重要地位。对于这些致病菌的快速、准确的检测，已经变成了食品安全领域的研究热点。
现阶段，虽然市场上已经有一些针对食源性病原菌的检测试剂盒，但大多数是基于Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)和文化方法（通常需经过好几个小时甚至几天才能得到结果的方法）进行检测的。在实际操作和应对突发情况上存在着很大的不便。反之，PCR技术却能够轻易对食源性致病菌进行准确、快速的检测，不用依赖培养样品，能够避免无法培养和多重耐药菌株的检测困难。
二、研究目的
针对目前市场上的食源性病原菌检测方法在实际应用中存在的不便和困难，以及PCR技术优势的明显性，本文旨在建立一种鲁棒的、灵敏度高、特异性强的PCR检测方法，以实现食源性病原菌检测工作的快速和准确。
三、研究内容和方法
1、样品制备：从市场上购买不同种类的食品样品，收集病原菌的DNA作为实验材料。
2、引物设计：根据已知的病原菌属种序列，设计合适的引物。
3、PCR反应：PCR反应分别采用标准PCR和实时荧光定量PCR，以实现对目标菌的特异性、灵敏度和快速检测等需求。并对PCR反应体系的组成、循环参数、酶种类、浓度等条件进行摸索和优化。
4、检测结果：检测PCR反应后的结果，利用凝胶电泳或荧光定量PCR技术对检测结果进行验证。
四、研究意义
实现食源性病原菌快速、准确的检测，对食品安全工作的重要性不言而喻。此项目的研究意义在于：
1、探讨PCR技术在食源性病原菌检测中的应用范围和可行性；
2、建立一种鲁棒的、灵敏度高、特异性强的PCR检测方法。在检测时间、准确性等方面相比文化方法和ELISA，都具有优势；
3、为相关科技工作者提供一定的参考和指导。
五、预期结果
1、建立一种基于PCR技术的食源性病原菌检测方法；
2、优化PCR反应体系和参数，找到最佳条件；
3、通过验证检测结果，发现和确认食品样品中存在的食源性疾病病原菌。
六、研究难点
1、如何设计特异性好、敏感度强的引物；
2、如何在样品中去除携带杂菌的影响，保证检测结果的准确性；
3、如何在PCR反应体系和参数上进行优化，寻找最佳组合方案；
4、如何验证检测结果的可靠性和有效性。
七、进展情况
该研究目前正处于研究初期，目前已购买样品并开始进行引物设计。下一步，将开始制备样品，进行PCR反应及结果验证。