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流式细胞术基本原理及应用ppt课件.ppt

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流式细胞术原理及应用流式细胞术流式细胞仪系统流式细胞仪的光信号1.散射光信号前向角散射光——FSC侧向角散射光——SSC散射光散点图——DotPlotReviewQuestion2.荧光信号荧光检测器Two-ColorCellAnalysis双色荧光散点图现代流式细胞仪包括液流系统SampleFlowinOpticalCuvetteReviewQuestionOpticsFACSCalibur光路图OpticsElectronicsCreationofaVoltagePulse-AnalogSignalQuantificationofaVoltagePulseEffectoftheInstrumentControlsontheDataReviewReviewQuestionsReviewQuestionsReviewQuestions样本处理细胞悬液的制备步骤一：选择合适的荧光染料荧光产生过程FITC和PE荧光光谱补偿模型图补偿调节前后对比步骤二：染色直接染色间接染色Avidin-BiotinmethodI示意图步骤三：数据收集和分析仪器设置调节关于同型对照数据分析如何设定阴性与阳性的界限直方图散点图细胞结构 细胞大小 细胞粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 染色体分析流式细胞仪的临床应用流式细胞仪的科研应用流式细胞仪的遗传学应用FlowCytometryWhatcanFlowCytometertellusaboutacell?细胞增殖（细胞周期）DNA探针NucleicacidProbesAtypicalDNAHistogram红色为正常二倍体细胞；黄色为异倍体细胞增殖相关基因BrdUrdIncorporationBrdUrdIncorporation细胞分裂的分析TracingDye(CFSE)ApoptoticCellDeath--ageneticallyencodedcelldeathprogram,whichismorphologically,biochemicallyandmolecularlydistinctfromnecrosisFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeath PhospholipidredistributionFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowcytometryofapoptoticcelldeathFlowCytometryofApoptoticCellsAnIntegratedApproachtoCellImmunologyImmuneFunctionassay淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析TraditionalAnalysis--PercentpositiveAbsoluteCounts--CellspermL抗原特异性T细胞MHC:ClassIandClassIIGeneProductsMHC/TCRSignaling二聚体可溶性MHC类似物与四聚体的比较Treg细胞的检测ImmuneFunctionAssays--APowerfulResearchToolforAnsweringBasicBiologicalQuestionsin...Traditional CytokineFlowCytometry细胞因子检测T细胞的细胞因子分型细胞因子BiologicalVariationAmongCMV-seropositiveDonorsinResponsetoCMVCFC&ProliferationCFC&ProliferationBDPhosflow磷酸化检测系统BDPhosFLOW和Westernblot的比较BDPhosFlowBDCBAMultiplexedBeadsMultiplexedBeads使用BD™CytometricBeadArray(CBA)系统你可以:目前CBA主要提供的检测内容BDCBAFlexSet更为灵活强大的CBAFlexSet9个指标同时检测活化T细胞KineticsofJurkatCellActivationWithAnti-CD3/CD28MonitoringtheTCellActivationPathwaybyCBA(Control)MonitoringtheTCellActivationPathwaybyCBA(PD-980