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产邻苯二酚菌株的筛选及相关基因的克隆的中期报告 一、选题背景 邻苯二酚是一种重要的有机合成中间体,广泛应用于染料、杀菌剂、树脂等行业。目前市场上邻苯二酚的大部分都是通过化学合成的方法制备而来,但这种方法存在成本高、对环境污染严重等不利因素。因此,研究利用微生物生产邻苯二酚已成为近年来的热点研究方向。 产邻苯二酚的微生物主要包括厌氧菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌等。经过初步筛选,我们从土壤样品中得到了一株潜在的邻苯二酚产生菌株,本次报告主要报告我们团队在这一菌株的筛选和相关基因的克隆方面的中期进展。 二、研究内容 1.菌株的筛选 以含有苯酚或邻苯二酚的培养基为筛选基质,将土壤样品分别接种到不同培养基中,经过数轮的筛选,最终从含有邻苯二酚的培养基中分离出了一株潜在的邻苯二酚产生菌株。 2.菌株的鉴定 对该菌株进行形态学、生理生化特性鉴定以及16SrRNA序列分析,结果表明该菌株属于XX属,命名为XX菌株。 3.邻苯二酚的产量测定 在不同的培养条件下,使用高效液相色谱法对XX菌株的邻苯二酚的产量进行测定。结果显示,在含有0.5%葡萄糖、0.1%尿素、pH7.0的培养基中,XX菌株的邻苯二酚产量最高,为XXg/L。 4.相关基因的克隆 根据已知的邻苯二酚合成途径,设计引物,PCR扩增出XX菌株中可能参与邻苯二酚合成的基因片段,经过克隆和测序,得到了基因序列。目前正在对基因序列进行功能鉴定和分析。 三、下一步计划 1.对基因进行功能鉴定和分析,探究XX菌株合成邻苯二酚的机制; 2.优化培养条件,提高邻苯二酚的产量; 3.探究XX菌株对各种废水的处理效果,开发XX菌株在环境治理领域的应用前景。