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产邻苯二酚菌株的筛选及相关基因的克隆的任务书 任务书 1.研究目标 本研究旨在筛选出产邻苯二酚的菌株,并克隆与邻苯二酚产生相关的基因。 2.研究内容 (1)筛选菌株:收集多种细菌和真菌菌株,经过筛选出产邻苯二酚的菌株。 (2)分离纯化邻苯二酚:从产邻苯二酚的菌株中提取邻苯二酚,并进行纯化。 (3)构建文库:将产邻苯二酚的菌株的基因组DNA提取,构建基因文库。 (4)筛选相关基因:利用邻苯二酚的代谢途径的基因启动子等,筛选出与邻苯二酚产生相关的基因。 (5)克隆相关基因:根据筛选得到的序列信息,利用PCR、蛋白表达、酶活性等方法,对相关基因进行克隆和鉴定。 3.研究方法 (1)菌株筛选:利用培养基筛选法和PCR检测法,对多种细菌和真菌菌株进行筛选。 (2)分离纯化邻苯二酚:采用基于硅胶柱层析和高效液相色谱法相结合的方法,对从菌株中提取的邻苯二酚进行纯化。 (3)构建文库:采用高通量测序技术,对产邻苯二酚菌株的基因组DNA进行测序,并根据测序结果建立基因文库。 (4)筛选相关基因:采用PCR、RT-PCR、蛋白质质谱等技术,对邻苯二酚代谢途径的基因启动子等进行筛选。 (5)克隆相关基因:利用PCR、蛋白表达、酶活性等方法进行基因克隆和鉴定。 4.研究意义 本研究可以为邻苯二酚代谢途径的研究提供相关的菌株和基因信息,为邻苯二酚在环境修复和利用等方面的应用提供基础数据和理论依据。 5.研究进度安排 本研究计划分为两年完成。 第一年主要进行产邻苯二酚菌株的筛选和邻苯二酚的分离纯化等实验工作,并构建基因文库。 第二年主要进行相关基因的筛选和克隆等实验工作,最终完成研究目标。 6.预期成果 (1)筛选出产邻苯二酚的菌株,并分离纯化出邻苯二酚。 (2)构建产邻苯二酚菌株的基因文库。 (3)筛选出与邻苯二酚产生相关的基因。 (4)克隆和鉴定与邻苯二酚产生相关的基因。 (5)发表相关研究论文。