一种新型的猪轮状病毒疫苗的VP6抗原.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107722110A(43)申请公布日2018.02.23(21)申请号201711133246.6(22)申请日2017.11.16(71)申请人青岛宏昊生物科技有限公司地址266000山东省青岛市城阳区双元路18号(72)发明人陈艺燕周佩佩(51)Int.Cl.C07K14/14(2006.01)C07K16/10(2006.01)C12N15/46(2006.01)C12N15/70(2006.01)A61K39/15(2006.01)A61P31/14(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表4页附图2页(54)发明名称一种新型的猪轮状病毒疫苗的VP6抗原(57)摘要本发明提供一种猪轮状病毒VP6抗原基因，其氨基酸序列为SEQIDNO:2；编码上述抗原的核苷酸片段，其一种序列为SEQIDNO:1。本发明筛选获得了一个新型的猪轮状病毒VP6基因，利用pET28a(+)表达性载体构建了能表达猪轮状病毒VP6基因1的大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌。经SDS-PAGE分析，表达出了重组目的蛋白。将重组蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，对猪轮状病毒具有显著的免疫效果。CN107722110ACN107722110A权利要求书1/1页1.一种猪轮状病毒VP6抗原蛋白，其特征在于，所述的抗原蛋白包含有：1)氨基酸序列为SEQIDNO:2的抗原；2)在1)中取代、缺失、添加一个或几个氨基酸，具有与1)中抗原的功能的蛋白。2.一种基因，其特征在于，所述的基因编码权利要求1所述的抗原蛋白。3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列为SEQIDNO:1。4.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体中插入了权利要求2所述的基因片段。5.一种制备权利要求1所述的VP6抗原蛋白的方法，其特征在于，所述的方法将编权利要求4所述的重组表达载体转化入大肠杆菌中，通过IPTG诱导表达制备重组表达的VP6抗原蛋白。6.权利要求1所述的VP6抗原蛋白在制备单克隆抗体或多克隆抗体中的应用。7.权利要求1所述的VP6抗原蛋白在制备用于预防猪轮状病毒的疫苗中的应用。2CN107722110A说明书1/7页一种新型的猪轮状病毒疫苗的VP6抗原技术领域[0001]本发明属于抗原制备技术领域，具体涉及一种新型的猪轮状病毒疫苗的抗原，即一种氨基酸序列发生变异的猪轮状病毒VP6基因。背景技术[0002]猪轮状病毒(RV)引起猪腹泻及幼猪死亡,给养殖户带来巨大的经济损失。应用疫苗免疫已经成为降低相关发病率、病死率和减轻经济负担的一个重要途径。养猪场等动物养殖场是该病的其主要疫源地。目前临床主要应用减毒苗来进行防疫,但由于轮状病毒的多型性；以及减毒苗与野毒株基因重组,引起回复突变；养殖动物长期排毒,污染水源、食品；这些因素都给该病的防疫造成巨大困难。近年来国外深入开展了新型轮状病毒疫苗的研究工作,并取得了巨大进展。其中主要为基因工程疫苗的研究，通过基因工程方法表达轮状病毒的抗原，免疫动物或人，从而达到免疫保护的目的。基因工程疫苗主要包括核酸疫苗、合成肤疫苗、重组表达抗原疫苗以及轮状病毒类病毒颗粒(VLP)疫苗等。[0003]但在目前使用的轮状病毒重组抗原亚单位疫苗研究中，由于轮状病毒基因组的多样性，导致制备的疫苗不能有效的预防不同基因背景的轮状病毒。且轮状病毒血清群和血清型众多,且不同毒株的生物学特性不同,故对轮状病毒的分离鉴定及相关特性的研究,无论是对该病毒的基础性研究亦或是对该病的应用性研究均具有十分重要的意义。发明内容[0004]本发明的目的是提供一种用于制备猪轮状病毒疫苗的抗原及其制备方法，从而弥补现有技术的不足。[0005]本发明首先提供猪轮状病毒VP6抗原基因，其氨基酸序列为SEQIDNO:2；[0006]编码上述抗原的核苷酸片段，其一种序列为SEQIDNO:1；[0007]本发明提供一种表达上述抗原的方法，是将编码上述抗原的核苷酸片段连接到原核表达载体上，转化入大肠杆菌中，通过IPTG诱导表达。[0008]本发明的VP6抗原可以用来制备单克隆抗体或多克隆抗体；[0009]本发明的VP6抗原用于制备用于预防猪轮状病毒的疫苗。[0010]本发明筛选获得了一个新型的猪轮状病毒VP6基因，利用pET28a(+)表达性载体构建了能表达猪轮状病毒VP6基因1的大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌。经SDS-PAGE分析，表达出了重组目的蛋白。将重组蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，对猪轮状病毒具有显著的免疫效果。附图说明[0011]图1:VP6扩增产物电泳图；[0012]图2：本发明筛选的VP6的blastp的结果图；其中Query为本发明的VP6；[0013]图