猪伪狂犬病毒gB5基因原核表达及表达产物ELISA检测方法的建立的任务书.docx

猪伪狂犬病毒gB5基因原核表达及表达产物ELISA检测方法的建立的任务书
任务书
一、任务背景
狂犬病是一种由病毒导致的致命性疾病，可以感染人和动物。猪伪狂犬病与狂犬病症状类似，但是其病原体是猪伪狂犬病病毒。猪伪狂犬病对猪养殖业造成了严重的经济损失，同时也对公共卫生造成了潜在危害。因此，对猪伪狂犬病的研究非常重要。
猪伪狂犬病毒的gB5基因编码狂犬病毒外壳蛋白的gB5亲和基序，是一种重要的蛋白质。建立该基因在原核表达系统中的表达方法，并利用表达产物进行ELISA检测，可以在一定程度上促进对猪伪狂犬病病毒的研究，同时也有助于对该病的预防和诊断。
二、任务目标
1、建立猪伪狂犬病毒gB5基因在原核表达系统中的表达方法。
2、制备高纯度的gB5表达产物，并进行Westernblot鉴定。
3、建立ELISA检测方法，利用表达产物进行ELISA检测猪伪狂犬病毒抗体。
三、任务内容
1、克隆目标基因
将目标基因gB5的编码序列克隆到表达载体中，构建原核表达载体。
2、测序和鉴定
将携带目标基因的载体进行测序验证，并通过Westernblot鉴定表达产物的纯度和功能。
3、表达和纯化
将载有gB5基因的原核表达载体转化到表达菌中进行诱导表达，并利用亲和层析等手段进行表达产物的纯化。
4、ELISA检测
将纯化的gB5表达产物进行ELISA检测，建立适用于检测猪伪狂犬病毒抗体的检测方法。
四、任务计划
本任务预计需要6个月的时间，具体计划如下：
第1-2个月：克隆目标基因。
1、设计引物，扩增目标基因gB5的编码序列，并将其克隆到原核表达载体中。
2、通过质粒鉴定和测序验证目标基因成功克隆。
第3-4个月：表达和纯化
1、将携带gB5基因的表达载体转化到表达菌中，进行诱导表达。
2、通过亲和层析等手段进行表达产物的纯化。
第5个月：鉴定
通过Westernblot等方法对表达产物进行鉴定，验证其纯度和功能。
第6个月：建立ELISA检测方法
利用纯化的gB5表达产物进行ELISA检测，并根据实验结果建立适用于检测猪伪狂犬病毒抗体的ELISA检测方法。
五、任务成果
1、成功克隆猪伪狂犬病毒gB5基因，并构建原核表达载体。
2、成功表达和纯化gB5表达产物，并验证其纯度和功能。
3、建立适用于检测猪伪狂犬病毒抗体的ELISA检测方法。
4、撰写研究论文，并提交到相关学术期刊发表。
六、参考文献
1.ZhengQL,etal.EstablishmentandApplicationofRecombinantEnzyme-LinkedImmunosorbentAssaysforAntigenicAnalysisofPseudorabiesVirusGP50Protein.Viruses.2019Jul22;11(7).
2.KimSH,etal.ExpressionofpseudorabiesvirusglycoproteinBgeneinabaculovirussystemanditsdiagnosticsignificance.JVetSci.2001Dec;2(2):103-7.
3.CaoY,etal.ExpressionandrecombinantproteinELISA-baseddiagnosisofGST-PCV2ORF2fusionproteinfromEscherichiaColi.IndianJVirol.2012Jan;23(1):23-7.