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人脂联素球状结构域(gAd)的原核表达、纯化及生物活性检测的中期报告
人脂联素球状结构域(gAd)是一种重要的调节性蛋白质，参与了多种生物过程的调节。为了进一步研究其生物学功能，本研究进行了gAd的原核表达、纯化及生物活性检测的中期报告。
首先，在重组载体pET30a(+)中构建了含有gAd基因的重组质粒，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过SDS-PAGE和Westernblot分析，确定了目的基因的表达情况，并发现在包涵体中高效表达。
随后，对包涵体中的gAd进行纯化，采用Ni2+柱拟合层析和大小分离柱层析相结合的方法，成功纯化了具有6His标签的gAd蛋白，在SDS-PAGE和Westernblot上也证实了目的蛋白的纯度和重组表达蛋白的大小，同时在质谱分析中进一步验证了gAd蛋白的纯度。
最后，进行了生物活性检测，采用了脂联素受体（Ob-R）细胞转染实验，结果表明高纯度的重组gAd可以激活Ob-R并促进STAT3的活化，从而证实了gAd蛋白的生物活性。
综上，本研究成功地进行了gAd的原核表达、纯化和生物活性检测，并为进一步探究gAd蛋白的作用机制提供了基础。