BCA蛋白浓度测定(整理版).doc

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BCA蛋白浓度测定

Pierce®BCAProteinAssayKit
(试剂盒室温保存)1.准备BSA标准品
按Table1配制一系列的蛋白标准品.
原液(stock):取出一个ample(内含2mg/mL的白蛋白标准品(此量足够3个replication)

2.准备BCA工作液(WorkingReagent,WR)
(1)用公式计算总工作液量
(标准品数+待测样品数)*(复制数)*(每个工作液的量)=总的需要的工作液的量
例子:3个待测样品,每个样品2个复制所需的工作液量
(9个标准品+3个待测样品)*(2个复制数)*(2ml)=48ml工作液
Note:试管法:每个试管需2ml工作液
微孔板:每个孔需200ul工作液(例子中需共4.8ml)
(2)BCA试剂A:B=50:1配制适量BCA工作液，充分混匀。对于上面的例子,试管法需要50mlBCAA液+1mlBCAB液,微孔板法需5mlA液和1mlB液.
B液加到A液中时,迅速浑浊,但是通过混匀立即变成清澈绿色的工作液.工作液在密闭室温下可以保存数天.
3.微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8)
(1).标准液和样品各25ul参加微孔板中
Note:假设样品有限,可各加10ul(样品与工作液比例=1:20)
(2).每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。
(3).在37度孵育样品30min，或室温2h。
(4).冷却至室温。
(5).在酶标仪中测量562nm时的吸光值
(6).绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。Note:540-590nm的波长均可

Figure1:TypicalcolorresponsecurvesforBSAandBGGusingtheStandardTestTubeProtocol(37°C/30-minuteincubation).