BCA蛋白浓度测定(整理版).doc

(完整版)BCA蛋白浓度测定(整理版)(完整版)BCA蛋白浓度测定(整理版)不得用于商业用途不得用于商业用途(完整版)BCA蛋白浓度测定(整理版)不得用于商业用途BCA蛋白浓度测定Pierce？BCAProteinAssayKit(试剂盒室温保存）1.准备BSA标准品按Table1配制一系列的蛋白标准品.原液（stock）：取出一个ample（内含2mg/mL的白蛋白标准品(此量足够3个replication)2。准备BCA工作液（WorkingReagent,WR)（1)用公式计算总工作液量（标准品数+待测样品数)*(复制数）＊(每个工作液的量)=总的需要的工作液的量例子:3个待测样品,每个样品2个复制所需的工作液量（9个标准品+3个待测样品)*（2个复制数)*（2ml）=48ml工作液Note:试管法：每个试管需2ml工作液微孔板:每个孔需200ul工作液（例子中需共4.8ml)(2）BCA试剂A:B=50：1配制适量BCA工作液，充分混匀。对于上面的例子，试管法需要50mlBCAA液+1mlBCAB液,微孔板法需5mlA液和1mlB液.B液加到A液中时，迅速浑浊，但是通过混匀立即变成清澈绿色的工作液.工作液在密闭室温下可以保存数天.3。微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8)(1).标准液和样品各25ul加入微孔板中Note：若样品有限，可各加10ul（样品与工作液比例=1：20）(2）.每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。（3）.在37度孵育样品30min，或室温2h。（4).冷却至室温.(5).在酶标仪中测量562nm时的吸光值（6).绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度.Note：540-590nm的波长均可Figure1：TypicalcolorresponsecurvesforBSAandBGGusingtheStandardTestTubeProtocol(37°C/30-minuteincubation）.仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。Forpersonaluseonlyinstudyandresearch；notforcommercialuse。NurfürdenpersönlichenfürStudien,Forschung，zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'étudeetlarechercheuniquementàdesfinspersonnelles；pasàdesfinscommerciales.толькодлялюдей，которыеиспользуютсядляобучения,исследованийинедолжныиспользоватьсявкоммерческихцелях。以下无正文