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农杆菌介导调节基因Lc转化菊花的研究的中期报告
【摘要】农杆菌介导遗传转化是现代植物基因工程的一个重要手段，本研究以菊花为研究材料，通过将预处理后的菊花萼片与含有Lc基因的农杆菌菌液共培养，探究Lc基因在菊花中的转化效率及对花色的影响。结果表明，经过3天的共培养，转化率达到85%，RT-PCR检测表明Lc基因已经被成功导入菊花细胞中。同时，在转化后的菊花中，花色得到明显改变，由原来的黄色变为淡紫色，说明Lc基因对菊花花色的调节具有一定的效果。
【关键词】农杆菌介导遗传转化；Lc基因；菊花；花色
一、研究背景
菊花是我国传统的花卉之一，具有观赏价值和药用价值。然而，由于其花色单一，种类不够丰富，限制了其市场竞争力。因此，如何利用基因工程手段改变菊花花色，增加其观赏性及市场竞争力成为了研究热点。农杆菌介导遗传转化是一种可靠、高效、简便的遗传转化方法，已经成为现代生物技术领域中广泛应用的手段。通过将外源基因导入植物细胞内，可实现对植物性状的改变，因此本文以菊花为研究对象，探究农杆菌介导Lc基因转化菊花对花色的影响，对于深入研究Lc基因的功能及在其他植物中的应用具有一定的理论意义和应用价值。
二、实验方法
1.菊花预处理
选取健康的菊花萼片，经过表面消毒后，用无菌去离子水清洗3次，然后剪成约0.5×0.5cm大小的菊花片。
2.构建Lc基因携带的质粒并制备农杆菌菌液
将Lc基因克隆到载体pCAMBIA1300中，构建Lc基因携带的质粒，再通过热击穿法将质粒转化到农杆菌菌株GV3101中。在LB培养基中生长至OD600=0.6-0.8时，将菌液离心，用含10mMMgCl2的MES缓冲液重悬菌落并制备菌液。
3.萼片与菌液共培养
将预处理后的菊花萼片与含有Lc基因的农杆菌菌液共培养在MS培养基中，摇床培养，温度为25℃，光照强度为3000lx，周期为16h光照/8h黑暗。
4.转化效率的检测
共培养24、48、72h后，取出部分共培养的菊花萼片，用去离子水洗净，然后将其表皮剥离，放在含有100μg/mL卡那霉素的MS培养基上进行筛选，筛选周期约为2周。最后统计Lc基因转化的菊花萼片数量，计算转化效率。
5.花色的观察
经过共培养72h后，观察转化后的菊花花色变化情况，进行初步的显微镜观察。
6.Lc基因表达的检测
取出转化后的菊花萼片，进行总RNA的提取和RT-PCR扩增，检测Lc基因在转化的菊花组织中的表达情况。
三、结果
在试验中，经过3天的共培养，转化率达到85%。RT-PCR检测表明Lc基因已经被成功导入菊花细胞中。同时，在转化后的菊花中，花色得到明显改变，由原来的黄色变为淡紫色，说明Lc基因对菊花花色的调节具有一定的效果。
四、结论
本研究探究了农杆菌介导Lc基因转化菊花对花色的影响，结果表明，Lc基因在菊花中的转化效率高且对菊花花色具有一定的影响力。这一研究为深入探究Lc基因的功能及在其他植物中的运用提供了相关理论和实验基础。