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第五章激光扫描共聚焦显微镜技术及应用一、什么是激光扫描共聚焦显微镜?1、荧光和荧光显微镜2、荧光显微镜3、普通荧光显微镜的不足LCSMImageofaXenopusMelanophore microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)http://www.itg.uiuc.edu/二、激光扫描共焦显微镜的原理原理小结: Confocal利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测,来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上,该点所发射的荧光成像在探测针孔上,该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的,因此被探测点即共焦点,被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上,为了产生一幅完整的图像,由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描,从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动,将样品新的一个层面移动到共焦平面上,样品的新层面又成像在显示器上,随着Z轴的不断移动,就可得到样品不同层面连续的光切图像。SeaUrchinEgg(Tubulin),FridayHarbor,UWGeorgevonDassow,Ph.D.三、激光扫描共焦显微镜的构成Laser andelectronic ControlUnit 激光光源及 控制装置共聚焦装置四、LCM的设计特点五、操作步骤六、共焦显微镜与传统显微镜的区别七、LSCM功能