关于病毒的液氮罐超低温保存法介绍.pdf

南京途威商贸有限公司液氮罐

关于病毒的介绍液氮罐超低温保存法

大多数微生，超低物都可温保存以用超法是适低温来用范围保存最广泛的微
生物。需要保存法复杂营，如用其他的养的微（如贮存方生物种法不能保持其活力
植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC1983；Halliday，
Baker1985）。此法是将冻存1℃／分在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（
钟）—150冷冻，℃，再将这些—150～－直至196℃的液小管贮氮中。存在

超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC常用一种由甘油
（10％）、二甲（5％）和培亚砜养液制。这些成的混化学合剂保存多数的细胞株
试剂进入细胞内可避免内膜的冷冻损伤。

贮存在低温。当小容器内，所形管被加的细胞成的热时复苏时必须小心操作
冰晶，正确会将细操作就。只要胞杀死迅速将可避免样品解这种事冻就能故减少
活力，做法：的丢失将封是口的小37℃的水，直至中管迅速，所有的放入冰融化
然后打开管口，将内容物移入培养基。

超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常低的环境中，因此需要液氮
罐。在长期贮存。这种的过程贮存方中必须式比冻经常注干法需意补充要更液氮
多的经费，包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。

1材料

病毒超低温NuncCryoflex保），存液所氮需材罐，料防有：热收缩塑料管（
护手套和面罩，永久性记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。

2方法

（1）剪一段两2cm的热端各超收缩塑出冷冻料管。管长度

（2）将含有澄清病毒悬液（组织培养的上清培养基，或组织培养基内的细
胞溶）冰浴解产物，用灭几分钟0.2ml菌移液冰浴均可过的上管将清悬液分装到
冷冻管内，并将盖子拧紧。

（3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，插入正确的标签。

（4）用喷灯小心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。注意不要用太高
的温度加热热收缩塑料管。

（5）再小心加热热收缩塑料管的两端，用大号镊子夹紧管的端口至完全密
封。
（6）将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时要求戴面
罩和）。手套
南京途威商贸有限公司液氮罐

（7）将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内，同时记录样品的详细的存
放位置、实验编号和存放日期等。

（8）需要用时，迅速从液氮罐内取出所需样品，并投入37℃水浴箱中解冻
后，用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时
不需要除去热收缩塑料管。