锌指核酸酶介导的奶山羊BLG基因敲除的任务书.docx

锌指核酸酶介导的奶山羊BLG基因敲除的任务书
任务书
任务题目：锌指核酸酶介导的奶山羊BLG基因敲除
任务描述：
本任务旨在利用锌指核酸酶技术，针对奶山羊中蛋白质质量最高的β-内酰胺酰亮氨酸（β-lactoglobulin，BLG）基因进行敲除，以降低人们对奶制品的过敏反应。本任务应包括以下步骤：
1.锁定目标基因序列
首先需要从已有的奶山羊基因组序列中锁定目标基因BLG的序列。BLG在山羊奶中含量较高，被认为是导致人们对奶制品过敏的主要蛋白质。
2.设计合适的锌指核酸酶
采用现有的锌指核酸酶技术，设计合适的核苷酸序列以使锌指核酸酶能够高效、准确地切割目标基因BLG。选择具有高度特异性和稳定性的锌指核酸酶，以保证准确地敲除目标基因。
3.合成锌指核酸酶
根据设计好的核苷酸序列，合成锌指核酸酶。通过克隆、表达和纯化等技术手段，制备出纯度高、稳定可靠的锌指核酸酶。
4.测定锌指核酸酶的活性和特异性
利用体外实验方法测定锌指核酸酶的酶活性和特异性，以确保锌指核酸酶能够高效、准确地切割目标基因BLG并保持对其他基因的特异性。
5.转化目标细胞
将制备好的锌指核酸酶引入奶山羊胚胎细胞或母细胞，利用转染、电穿孔、基因敲入等方法，经过筛选和鉴定，确保锌指核酸酶有效地被转化并敲除了目标基因BLG。
6.验证敲除效果
对目标细胞进行基因测序或PCR验证，确保BLG基因被敲除。同时，进行蛋白质质量分析，比较敲除前后的奶山羊中BLG蛋白的含量，以确认敲除效果。
7.安全评估
进行安全性评估，评估BLG敲除奶山羊的食品安全性和环境影响等方面的风险。
任务产物：
1.锁定目标基因BLG的序列及突变位点信息；
2.设计合适的锌指核酸酶并得到合成材料；
3.锌指核酸酶的高效、特异性表征数据；
4.敲除目标基因BLG的奶山羊；
5.敲除效果验证数据；
6.安全性评估报告。
任务进度：
本任务计划周期为18个月，具体进度安排如下：
第1-3个月：锁定目标基因BLG的序列及突变位点信息；
第4-6个月：设计合适的锌指核酸酶并得到合成材料；
第7-9个月：锌指核酸酶的高效、特异性表征数据；
第10-14个月：敲除目标基因BLG的奶山羊；
第15-16个月：敲除效果验证数据；
第17-18个月：安全性评估报告。
任务报告：
本任务完成后，需提交完整的任务报告，内容包括：任务目的、研究方法、实验结果、结果分析和评价、结论、参考文献等。报告应该能够清晰地表达出本研究的目的、研究方法、数据解释及结果和结论等方面的要点，并根据实际情况提出进一步研究建议。
任务评估：
本任务由专业的评估团队进行评估。评估主要依据研究目的、实验设计、研究数据及其解释、论证、研究结论、发表论文等多方面进行评估，并给予具体的评估意见和建议。