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DEK蛋白真核表达纯化及其活性检测的中期报告
本实验的目的是在真核系统中表达、纯化和鉴定DEK蛋白。在本次中期报告中，我们主要完成了以下工作：
1.构建DEK基因的真核表达系统。我们在真核表达载体pEGFP-N1上将DEK基因克隆下来，并用PCR验证确保插入物的正确性。然后将质粒转染至HEK293细胞中，通过Westernblot验证DEK蛋白的表达。
2.优化DEK蛋白的纯化方案。我们首先尝试了离心、胶体共沉淀和磷酸铵盐沉淀等不同方法对细胞进行裂解，最终选择了超声波破碎法获得更高的蛋白质产量。接着，我们使用柱层析法对DEK蛋白进行纯化，最终获得了高纯度的DEK蛋白。
3.进行了DEK蛋白的活性鉴定。我们采用EMSA实验和人AbsorbanceDetectionKit进行了DEK蛋白的两项物质上的检测，并得到了可信的结果。其中，EMSA实验表明得到的DEK蛋白能够结合目的DNA，证明DEK蛋白的功能性完整；而AbsorbanceDetectionKit实验则表明获得的蛋白质浓度较为稳定，可用于后续实验。
4.制备了DEK蛋白的单克隆抗体。我们以DEK全长蛋白作为抗原，进行小鼠的免疫和巨细胞瘤的制备。接着进行ELISA、Westernblot和免疫荧光实验鉴定，得到多个DEK单克隆抗体株系。
总体来说，我们已经成功在真核系统中表达、纯化和鉴定了DEK蛋白，并制备了多种单克隆抗体，为后续DEK蛋白的进一步研究奠定了基础。