siRNA逆转肿瘤多药耐药性的体内外研究的任务书.docx

siRNA逆转肿瘤多药耐药性的体内外研究的任务书
一、研究背景及意义
随着化疗、放疗等多种治疗手段的应用，肿瘤治疗取得了一定进展，然而多种化疗药物的应用也导致了肿瘤细胞对药物的多重耐药现象的出现。因此，研究如何逆转肿瘤细胞耐药性成为了当前肿瘤研究的热点之一。
RNA干扰技术（RNAi）是近年来发展起来的一种新型的基因调控技术，利用RNAi技术制备的小干扰RNA（siRNA）可以靶向特定基因及其编码产物，从而在细胞内产生目标基因的沉默效应。siRNA的应用已经在治疗某些遗传性疾病和癌症等疾病中取得了较好的治疗效果。因此，本研究拟通过RNAi技术设计合适的siRNA分子，靶向已知的耐药基因，以达到逆转肿瘤多药耐药性的目的。
二、研究目的
1.设计合适的siRNA分子，靶向已知的肿瘤细胞多药耐药基因，包括ABCB1、ABCG2等；
2.构建合适的siRNA载体，并对其进行相关性能测试；
3.优化siRNA转染条件，以提高转染效率；
4.对肿瘤细胞进行体外实验，评估siRNA逆转多药耐药性的效果；
5.对动物模型进行实验，评估siRNA逆转多药耐药性的效果。
三、研究内容及步骤
1.设计siRNA分子，靶向已知的肿瘤细胞多药耐药基因
（1）通过文献调研和基因数据库分析，确定靶向多药耐药基因的特异性siRNA序列；
（2）对设计的siRNA序列进行体外验证，筛选具有良好沉默效果的siRNA分子。
2.构建合适的siRNA载体，并对其进行相关性能测试
（1）优化siRNA载体的设计和构建策略；
（2）对构建的siRNA载体进行物理特性测试和生物活性测试。
3.优化siRNA转染条件，以提高转染效率
（1）对转染条件进行优化，包括转染时间、浓度、载体比例等；
（2）对siRNA转染后的细胞进行荧光显微镜观察和蛋白质表达检测。
4.对肿瘤细胞进行体外实验，评估siRNA逆转多药耐药性的效果
（1）选择耐药和敏感肿瘤细胞株，进行siRNA转染实验；
（2）对转染后的肿瘤细胞进行细胞存活率测定和药物敏感性检测等实验。
5.对动物模型进行实验，评估siRNA逆转多药耐药性的效果
（1）建立肿瘤动物模型，包括荷瘤小鼠和裸鼠等；
（2）对建立的肿瘤动物模型进行siRNA逆转多药耐药性的研究。
四、研究进度及预算
1.研究进度：
前期：2022年1月至2022年8月
确定研究方案、设计siRNA分子并进行体外筛选、构建siRNA载体，并进行相关性能测试。
中期：2022年9月至2023年4月
优化siRNA转染条件，对转染后的肿瘤细胞进行体外实验，评估siRNA逆转多药耐药性的效果。
后期：2023年5月至2023年12月
对动物模型进行实验，评估siRNA逆转多药耐药性的效果，撰写研究报告。
2.预算：
实验材料费用：人民币20万元
设备折旧费用：人民币10万元
实验动物费用：人民币30万元
人员费用：人民币50万元
会议出差费用：人民币5万元
合计：人民币115万元。