碱性淀粉酶产生菌的筛选(Ⅰ).pdf

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碱性淀粉酶产生菌的筛选(I)

贾士儒郭淆苏晓婷
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(天津轻工业学院，天津)
々；、

摘要

从15份土样中筛选出一株产碱性淀粉酶的嗜碱性芽孢杆菌T_G—A2，能在phi0以上生
长、产酶，最适生长pH为9．5～l。'在20~35。C范围内，最适pH为8。种龄l6小时，接种量

很仨l}，除人们熟知的碱性蛋
已形成规模生产，碱性纤维
素酶研制已进入中试阶段。但作为洗涤剂用酶之一的碱性淀粉酶，还未见报道。
国外碱性n一淀粉酶的研究始于7O年代初，目本学者分离获得了一株芽孢杆菌可在pH
IO．5有n一淀粉酶活力[】]；80年代末期，印度学者从土壤中分离获得一株产高温一淀粉酶的
菌株脚。但还未见有商品碱性淀粉酶出售。从节能来看，开发研慵}温洗涤用酶很有意义。本
实验室获得昀嗜碱性芽孢杆菌可以在高碱性(pHIJ)条件下产酶，这种嗜碱性微生物生产的碱
性淀粉酶有可能用于洗涤等方面。

材料与方法

一
、土样来源
采自天津大港、河南、河北、四』jf、陕西、内蒙、新疆等地，共计15份。
=、培养基
1．菌种保藏转代培养基Es]
2．平皿分离及斜面种子培养基()：酵母膏0．5，蛋白陈05．可溶性淀粉1．0，磷酸氢
二钾0．1，硫酸镁0．02，琼脂2，DH9．0～l0。
3．摇瓶发酵培养基()，配方(1)：同分离培养基，但不加琼脂；配方(2)：玉米淀粉1．5，
玉米装3．0(固形物含量40)，豆饼粉i．0，磷酸氢二钾0．i，硫酸镁0．02，pH9．0～i0。
三、菌种分离与筛选
采用稀释分离洼进行萄种分离，将分离的菌种转接引鉴剐培养基(成舒同分离培养基)平
皿上，通过透明圈大小，选出产淀粉酶的菌株。
复靖是将初筛获得的萄株分别接至摇瓶发酵培养在(配方i)中，250毫升三角瓶装液量
5O亳升．30。C培养48小时，州定淀粉酶活力，j耄m话较高的圆佧

14
四、发酵实验’
将菌株转接至斜面种子培养基上，30c，活化24小时．接2环于种子瓶(发酵培养基配努
1)，30~C培养16小时，再接入发酵培养基(配方2)，接种量5，500毫升三角瓶装液量50毫
升，30。C，往复摇床上培养48小时j。
五、酶活力的测定’．“
取I毫升pH9的0．2摩尔甘氨酸一氢氧化钠缓冲液，加0．2毫升1的可溶性淀粉溶液
平衡温度后，加入0．1毫升去细胞的稀释酶液，30保温l0分钟．加入1毫升1当量盐酸溶液
终止反应，再加0．O1碘液2毫升显色，定容至25毫升，在68o纳米条件下测定箕光密度僵。
以加入终止液后再加淀粉溶液的样为空白。酶活力的定义是：30。C，10分钟，光密度下降10
的酶量为一单位。’
六、有关试剂
玉米淀粉为河北省沧州市利民粉丝厂产品}可溶性淀粉为浙江省菱湖淀粉厂产品；酵母膏
为上海酵母厂产品；蛋白腺为上海东海制药厂产品；玉米浆取自天津味精厂；豆饼粉取自天津
酶制剂厂；琼脂采用进口分装产品。、⋯

I
结果．

一
、菌种分离与筛选’。。：。。’
根据碱性微生物较一般微生物更有可能产生碱性淀粉酶这'基本思路．采用了碱挂平板
进行分离。从第一步分离中筛去了大量不能在碱性平板上生长的微生物，进一步通过鉴别培养
基的筛选．从土样中共分离出392株产碱性淀粉酶的菌株。392株菌分别在发酵培养基(配方
1)上培养后．通这测定碱性淀粉酶活力，共获得68椿菌。一
将初筛获得的菌株进行摇瓶培养，有七株菌产酶活力较高(表1)。其中TG一42菌株在较
强碱性(pHI1)条件下们有较高的淀粉酶活力，因此，选基作为实验用菌．
表l产碱淀糈酶茵辕的复筛结果

●
菌株号来源酶浩I力(乎伍／毫升)～

30℃．PH1l4U。C．DH9

TG一86江苏69299

TG—A2江苏92282

7一B40四川7022O

7一G3I四川61l77

5—12a新疆75227

，
5一SI4新疆85241

5-SI3新疆95190

二、TG-A2菌株的菌学鉴定：
TG—2菌蛛为革兰氏阳性短杆状，多为单个排列．运动，孢子捕国形或柱擞，审生或偏
中生。最低生长温度5~C。接触酶反应阳性；有V．