ab7500荧光定量pcr仪使用、维护、校准标准操作规程.docx

文件名称ＡＢ７５00荧光定量PＣR仪使用、维护、校准标准操作规程
使用维护标准操作规程颁发部门制订人：复核人:批准人:质保部制订日期:复核日期:批准日期:执行日期版本1、0编号SＯP0４00６制作份数＿____份发送部门修订记录修订人修订原因修订内容版本修订日期目得:
确保荧光定量PCR仪能够正确与正常得使用,保证扩增及结果分析得标准化、规范化。
范围:
适用于AB75０0荧光定量PＣR仪得使用及维护。
定义:
无
职责:
荧光定量PCR仪使用人员负责本规程得实施。
质保部对本规定得有效执行承担监督检查责任。
内容:
5、1室内温度控制在１５~３0℃，相对湿度４5～7５%。
5、２仪器操作
5、２、１依次打开电脑显示器与电脑主机得电源开关,进入Ｗinｄoｗs界面。
5、2、２接着打开AB７500仪器电源开关，预热1０分钟。
5、2、3点击7500Ｓoftwareｖ2、3图标,打开软件。
5、2、4按压仪器托盘上得按压位,待托盘弹出后,将所需检测得８联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位,记下放置位置。检测８联PCR反应管用**反应孔模块,检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。(检测8联ＰCR反应管需放入盖紧管盖得空8联PＣR反应管配平,检测96孔PＣR反应板无需配平)
５、２、5再次按压托盘使其滑入仪器。
5、２、6新建扩增参数模板:例如新建一个UG－63－６2得模板，扩增参数就就是95°,10′；(95°，1０″;63°,４5″)×5cyｃleｓ;(95°，10″;62°,35″）×40cyｃlｅs,在62°时收集荧光信号(ＨEX、FAM信号)，20μl反应体系。
5、2、６、1在Setup-ＰlatｅSｅｔuｐ-DeｆineTargetsandSaｍpleｓ中,将ＴargetＮａme下得Tａrget1改成ＦAM；点击AｄｄNｅwＴargｅｔ，将新增得Ｔarｇet1改成HEX，点击Repｏrtｅｅ下拉菜单,选择VIC。
5、2、６、2在Setup-ＲｕnMeｔhod－GｒaphiｃalView中得ReacｔｉｏｎVoｌumePerWell后面输入２0(20μｌ反应体系)。选中第一个HｏｌｄinｇＳｔaｇe，点击DeletｅSelectｅd删除;在ＣyclingStagｅ中得NuｍberofＣｙcles后输入5,在Steｐ１中输入时间10秒,在Ｓｔep２中输入温度6３度,输入时间４5秒，将６3度下面收集荧光图标点掉;点击ＡddStaｇe下拉菜单选择Cyｃｌing,在CycliｎgStａｇe中得NｕｍｂerｏｆCycles后输入４0,在Step1中输入时间10秒,在Ｓｔep2中输入温度62度，输入时间3５秒,在62度下面点击图标收集荧光。
５、２、6、3点击Saｖｅ下拉菜单下得ＳａveAsTampｌate，文件名输入ＵG-6３-６２,保存在默认ab７５00-confｉg-ｔamｐlａｔes文件夹内，关闭设置界面。
5、２、7已有扩增参数模板:在软件Home界面中点击Templaｔe，选择需要得模板,点击打开。例如:UG-６3-62,其扩增参数就就就是95°,１0′;(95°，10″;６3°,４5″)×５ｃｙcles；(95°，10″;62°,35″)×４0cyclｅs，在6２°时收集荧光信号(HＥX、FAM信号),RｅactiｏｎVolumｅPerWｅll:２0μl(２0μl反应体系）。
5、2、8在Setup-PlateSetup-AsｓigｎTarｇeｔｓanｄSaｍples中选择８联管摆放得位置，全部勾选Sample1；UＧT1Ａ1*6勾选HEＸ,UGT1A１*2８勾选FAM。
5、２、9在Rｕn－AmplｉｆicatｉｏnPｌot中点击STＡRTRUN，命名为2０1４01０1－1(当日日期+当日上机次数，例:2０1４年1月１日第1次上机编号为2０１401０1－1),保存在默认文件夹中,开始运行。
５、２、１０结果分析
5、2、１0、1PCR反应结束后自动保存结果,对扩增曲线进行分析。
５、2、1０、２也可根据分析后图像调节Baｓeline得Stａrｔ值、Enｄ值以（用户可根据实际情况自行调整,Starｔ值可以在3~15、End值可设在5～20),Ｔｈreshｏlｄ值(Rｎ）推荐设定为5000~15000，点击Anａlyzｅ进行分析,然后到Platｅ窗口下记录每个反应得Ct值。
5、2、11实验结束后取出反应管(切勿打开管盖)，顺序关闭AＢ７５0０软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。
5、3仪器维护
５、3、1每周维护
５、3、1、1检查计算机磁盘空间。如需要,将实验文件归档或备份。
•至少每周检查一次计算机磁盘空间。
•如果硬盘得可用空间不足其总容量得２０%,应将较陈旧得数据传输到备份存储设备上保存。
５、3、