Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）.pdf

Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校

准（SOP-1）

1目的：确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。
2适用范围：Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。
3操作人****
4标准操作方法：
4.1在打开电源以前，先确认以下内容：
4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。
4.1.2Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。
4.2．核酸扩增仪操作方法：
4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR检测系
统”界面；
4.2.2模板制好后，按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽，注意阴阳性、
阳性标准品、质控品位置，标本不够用空白管填补；
4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟；
4.2.4点击“运行”键，打开“运行”文件中“达安”试剂程序；
4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮，输入样本资料，并清空缺省样本号；
点击“确认”保存样本资料信息，保存的文件名为：年月日+批次（批次用
a、b、c表示）如20030516a文件自动形成后缀名为*.flr
4.2.4点击仪器运行的红色按钮“！！”，仪器进入运行状态。
4.2.5检测结果分析：
a.程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定
量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。
b.定量分析：
1）单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择
样点拟合法。
2）样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系
统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉
点即为CT值（仅适合于样点拟合）。
3）击“零点调整”，在弹出零点调整对话框进行设置——手动调整：以设置的
起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光
强度稳定（用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品
4）检测，通常起始及终止为5-15，结果较理想）。
5）单击“噪声容限”，在基线和域值设置对话中设置基线位置。基线应设置在
各样本噪声的上方并尽可能的底，对同一种试剂在各个实验的结果分析时
基线设置尽可能相同。同一实验结果分析，基线设置不同CT值不同。
6）单击“定量分析”，在基线和域值设置对话框中设置域值位置。本批试剂的
截距控制在42±2、斜率控制在-2.7±0.2、相关系数小于-0.98。设置完
成后界面显示分析结果。
（在每进一批试剂的时候，用本批试剂测定上一批稳定的试剂已测定过的
控制品及阴阳对照，根据上批试剂测定的结果求出本批试剂在这种结果下
的“截距”、“斜率”、“相关系数”范围；在用“本批试剂”进行实验时，
本室其它人员判断结果，这些参数必须控制在此范围，这样结果判断在本
室才具一致性。每进购一批试剂后，在SOP文件中，这些参数也需调整。）
4.3分析结果打印。
4.4Line-Gene基因扩增仪使用过后要及时记录（Line-Gene基因扩增仪的使用记
录见表9）
5维护方法及注意事项：
5.1PCR仪属于精密电子仪器，应放在水平台上，PCR仪在运行的时候，室温应
当控制在15℃至25℃之间，温度过高或过低均会引起内部的程控芯片或其它
电子元件的不正常工作。
5.2PCR仪配有单独使用的ups稳压电源。PCR仪不能靠近水池、火炉、腐蚀性
物质、强磁场等，均会影响仪器正常工作。
5.3每次实验时，最好能将扩增仪的孔位全部放置样品管，若样品管少时可用空
的样品管代替，以保证实验田的一致性和重复性。
5.4实验结束后应及时擦干孔内存在的水份，盖上机盖。
5.5本仪器表面如有污迹，可用软布沾清洁膏擦拭干净。
5.6每周五清洗样品槽一次。方法是用棉棒沾75%的乙醇清洗若干次，以有灰尘
或其它残留物影响扩增效果。
5.7每月末清洁热盖和反应孔。具体方法是：正常关机后，将反应槽取出，将热
盖翻开，用浸透95%酒精棉棒擦拭反应孔和热盖，待乙醇挥发后再将热盖和反应
槽安装好，热盖恢复原位。
5.8荧光定量PCR检测系统软件的维护：
5.8.1安装荧光定量PCR检测系统软件
计算机进入Window98/2000/XP系统后，将荧光定量PCR检测系统安装光
盘放入光驱,找到光盘根目录下的SETUP.EXE双击它，进入设置程序荧光
定量PCR检测系统。
据屏幕提示进行操作即可完成荧光定量PCR检测系统软件的安装。
5.8.2卸载荧光定量PCR检测系统软件：
在【开始】/【设置】/【控置面板】菜单中单击“添加删除程序”项，选
择“荧光定量PCR检测系统”，单击删除即可完成卸载荧光定量PCR检测系统.
5.9Line-Gene基因扩增仪的维护保养后要及时记录（Line-Gene基因扩增仪的维
护保养记录