大丽轮枝菌内生菌及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109988727A(43)申请公布日2019.07.09(21)申请号201811591585.3A01P3/00(2006.01)(22)申请日2018.12.25C12R1/19(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20187152018.10.26(71)申请人南阳师范学院地址473061河南省南阳市卧龙区卧龙路1638号(72)发明人张林陶冶陈俊梅李文鹏黄冰纷牛秋红(74)专利代理机构北京中恒高博知识产权代理有限公司11249代理人吕玉博(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)权利要求书1页说明书4页A01N63/00(2006.01)序列表2页附图1页(54)发明名称大丽轮枝菌内生菌及其应用(57)摘要本发明提供大丽轮枝菌内生菌，所述内生菌为肠杆菌属EnterobacterxiangfangensisV1菌株，保藏编号为CCTCCM2018715。本发明采用的是肠杆菌属(Enterobacterxiangfangensis)V1菌株，该菌株具有抑制大丽轮枝菌的功能。该肠杆菌中的过氧化物酶基因全长603bp，编码200个氨基酸，将该基因异源表达后，其表达产物亦具有抑制大丽轮枝菌的功能。本发明利用生防技术为棉花黄萎病的防治提供了微生物资源，同时同化学防治相比避免了环境污染等方面的问题。CN109988727ACN109988727A权利要求书1/1页1.大丽轮枝菌内生菌，其特征在于：所述内生菌为肠杆菌属EnterobacterxiangfangensisV1菌株，保藏编号为CCTCCM2018715。2.权利要求1所述的大丽轮枝菌内生菌在抑制大丽轮枝菌活性中的应用。3.权利要求1所述的大丽轮枝菌内生菌在防治棉花黄萎病或制备防治棉花黄萎病的菌剂中的应用。4.权利要求1所述的大丽轮枝菌中过氧化物酶在抑制大丽轮枝菌活性、防治棉花黄萎病或制备防治棉花黄萎病的菌剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述过氧化物酶基因的cDNA核苷酸序列为序列表中SEQIDNO.1。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述过氧化物酶基因的氨基酸序列为序列表中SEQIDNO.2。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述应用是将过氧化物酶异源表达后，表达产物具有抑制大丽轮枝菌活性或防治棉花黄萎病的作用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述将过氧化物酶异源表达是将过氧化物酶与载体PET32a连接，导入感受态细胞，进行诱导表达。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述诱导表达是在25℃，用0.5mMIPTG诱导8h。10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于：在所述诱导表达后还包括蛋白纯化的步骤。2CN109988727A说明书1/4页大丽轮枝菌内生菌及其应用技术领域[0001]本发明属于生物防治植物病害技术领域，具体涉及大丽轮枝菌内生菌及其应用。背景技术[0002]棉花是重要的纤维植物，由大丽轮枝菌侵染引起的黄萎病是棉花的主要病害之一，被称为“棉花癌症”。其病原菌存活力强，菌核在土壤中无寄主情况下可存活10多年之久，病原菌群体遗传多样性丰富，易变异等。此外，大丽轮枝菌的寄主范围极广，国外报道可为害38科660种植物，其中农作物184种，杂草153种。我国经鉴定，寄主植物至少20科80种，大田作物包括向日葵、茄子、辣子、番茄、烟草、马铃薯、甜瓜、西瓜、黄瓜、花生、菜豆、绿豆、大豆、芝麻、甜菜等作物。其中棉花是世界上分布最广、种植面积最大的经济作物之一，也是受危害最为严重的农作物之一，棉花黄萎病是是世界性的危险病害，也是中国棉花生产中的严重病害，并且由于大丽轮枝菌能形成休眠结构的微菌核，其对不良环境有较强的抵抗力，能耐80℃高温和-30℃低温，故在极端条件下可以形成有较强保护作用的微菌核，当外界环境适合其萌发时又可以形成具有较强感病性的真菌状态。我国每年棉花黄萎病的的发病面积将近占全国种植面积的15％-20％，严重年份甚至可以达到50％之多，有些病害严重的种植区域可能会发生绝收的现象。黄萎病不但降低了棉花的产量而且也会降低棉花的纤维品质、种子产量和种子的产油量等，进而造成较为严重的经济损失。[0003]目前，国内外对棉花黄萎病的防治主要是采用轮作倒茬、选育抗病品种、化学防治等传统手段，但防病效果都不理想，这些方法均有一定的限制和不足之处，操作性、适应性差或者效果不理想。植物病害的生物防治由于其安全、有效、低毒、残留少越来越引起人们的重视，生物防治被认为是最具有发展潜力的防治方法。内生细菌作为一种生防资源，己成为近年来生防菌剂研制开发的热点，因此，对黄萎病的生防研究自然成为重点和焦点问题。发明内容[0