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第六章RNA的生物合成反应体系:DNA模板,NTP,酶,Mg2+,Mn2+,合成方向5'→3'。连接方式--3',5'磷酸二酯键。 转录特点:不对称转录--DNA片段转录时,双链DNA中只有一条链作为转录的模板,这种转录方式称作不对称转录。 模板链(templatestrand)及反意义链(antisensestrand):指导RNA合成的DNA链为模板链,又称反意义链。编码链(codingstrand)及有意义链(sensestrand):不作为转录的另一条DNA链为编码链,又称有意义链。由于基因分布于不同的DNA单链中,即某条DNA单链对某个基因是模板链,而对另一个基因则是编码链。 原料:四种磷酸核苷NTP,DNA中的T在RNA合成中变为U 合成过程:连续, 方向:5‘→3’从头合成,5´—末端的起始核苷酸常为GTP或ATP不对称转录 “转录单位”(transcriptionunit) 以操纵子(operon)为转录的功能单位,结构上包括四个功能区:多顺反子(结构基因区)、启动子、操作子、终止子和调节基因。 原核RNA聚合酶 转录过程 大肠杆菌的RNA聚合酶 全酶由5种亚基α2ββ’σ组成,σ因子与其它部分的结合不是十分紧密,它易于与β’βα2分离,没有σ、亚基的酶称为核心酶——只催化链的延长,对起始无作用。 五种亚基的功能分别为: α亚基:与启动子结合功能。 β亚基:含催化部位,起催化作用,催化形成磷酸二酯键。 亚基:在全酶中存在,功能不清楚。 β’亚基:与DNA模板结合功能。 σ亚基:识别起始位点。 识别 解链 起始 延伸 终止1.起始位点的识别 σ识别正确的启动位点,启动子的结构至少由三部分组成:-35序列提供了RNA聚合酶全酶识别的信号;-10序列是酶的紧密结合位点(富含AT碱基,利于双链打开);第三部分是RNA合成的起始点。 4.转录终止 转录终止信号有两种情况 弱终止子:依赖ρ因子(终止因子,terminators)的终止 NusA蛋白识别DNA链上的终止信号,在ρ因子帮助终止。 强终止子:(1)在终止点之前具有一段富含G-C的回文区域。(2)富含G-C的区域之后是一连串的dA碱基序列,它们转录的RNA链的末端为一连串U(连续6个)。三、真核生物的转录作用四、转录过程的选择性抑制剂五、转录产物的“加工”(成熟过程)rRNA前体的加工 rRNA基因之间以纵向串联的方式重复排列。 加工过程: 1、剪切作用:需核酸酶参与。2、甲基化修饰:修饰在碱基上。3、自我剪接:一种核酶的作用。原核rRNA加工:rRNA含非转录的间隔区,其产物中含tRNA 真核rRNA加工: 1.5S自成体系加工少无修饰和剪接。2.45S加工中含剪切和甲基化修饰,需核酸酶。大肠杆菌rRNA前体加工tRNA前体的加工 tRNA前体在tRNA剪切酶的作用下,切成一定在小的tRNA分子 3’末端加上CCA 碱基的修饰:甲基化、脱氨和还原作用真核mRNA前体的加工六、RNA的复制合成(RNA指导的RNA合成)本章重点:识别 解链 起始 延伸 终止1.起始位点的识别 σ识别正确的启动位点,启动子的结构至少由三部分组成:-35序列提供了RNA聚合酶全酶识别的信号;-10序列是酶的紧密结合位点(富含AT碱基,利于双链打开);第三部分是RNA合成的起始点。 大肠杆菌rRNA前体加工tRNA前体的加工 tRNA前体在tRNA剪切酶的作用下,切成一定在小的tRNA分子 3’末端加上CCA 碱基的修饰:甲基化、脱氨和还原作用六、RNA的复制合成(RNA指导的RNA合成)