试验12质粒DNA的转化.ppt

DNA的性质一、实验目的①机械方法：超声波法、研磨法、匀浆法②化学试剂法：用SDS、盐酸胍等变性剂③酶解法：溶菌酶或蜗牛酶

G+和G-细胞壁组成不同，采用SDS法、盐酸胍法可直接裂解大肠杆菌等G-的细胞。而枯草杆菌是G+，所以在SDS处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁。溶菌酶是一种糖苷水解酶，它能水解菌体细胞壁的主要化学成份肽聚糖中的β—1，4糖苷键2.去除蛋白3.析出DNA：DNA提取的一般流程提取总DNA和质粒DNA的区别要获得大片段的DNA分子，就要尽可能地温和操作，减少剪切力，减少切断DNA分子的可能性；

分子热运动也会减少所抽提到的DNA分子量，所以提取过程也要尽可能在低温下进行；

另外细胞内及抽提器皿中污染的核酸酶也会降解制备过程中的DNA，所以制备过程要抑制其核酸酶的活性。检验DNA产物
（琼脂糖凝胶电泳）电泳技术该过程可以通过相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳，然后通过示踪染料EB染色而得到检测。
EB：3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐(EthidiumBromide，溴化乙锭)。
染色机制：EB能插入DNA的碱基对中与DNA结合。
显色：EB以590nm波长发射出橙红色荧光。
优点：简便、快速、灵敏度高（10ng）琼脂糖凝胶电泳4.在每个点样孔中加入6μl样品，样品的组成为：2μlloadingbuffer、4μlDNA样品。在最左侧的点样孔中加入双酶切marker样品的组成为：3μlloadingbuffer、2μl无菌纯水、1μlmarker。

5.90V恒压电泳45-50分钟。

6.当溴酚兰移动到距离胶板下沿约1cm处停止电泳。7.将凝胶放入溴化乙锭（EB）溶液（0.5g/ml左右）中染色约20min。

8.观察与拍照:在紫外灯(310nm波长)下观察染色后的凝胶。DNA存在处显示出红色的荧光条带。紫外光激发30s左右，肉眼可观察到清晰的条带。UV摄像观察保存。取样：枪尖接触液面
勿伸入底部三、实验报告