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核心要点突破③制备:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。(2)无菌技术 主要是为了防止外来杂菌的入侵,重点是消毒和灭菌。 ①消毒和灭菌的区别②三种常用灭菌方法的比较(3)微生物的纯化培养 包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段,纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。 平板划线法和稀释涂布平板法的比较2.微生物的分离和计数 (1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ①筛选菌株:利用选择培养基筛选菌株。 ②测定微生物数量的常用方法: 统计菌落数目和显微镜直接计数。 ③过程:土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。 (2)分解纤维素的微生物的分离 ①实验原理二、传统发酵技术的应用 1.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及控制条件的比较2.果酒、果醋、腐乳和泡菜制作过程比较及亚硝酸盐含量的检测三、植物有效成分的提取 1.植物芳香油三种提取方法的比较2.实验流程设计 (1)玫瑰精油的提取实验流程四、植物的组织培养技术 1.原理:细胞的全能性 (1)植物体内已分化的细胞,在离体状态和一定的条件下,可以发育成完整的植株,其过程如下:2.植物茎的组织培养与花药植株的产生的比较3.植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术的比较五、酶的研究与应用 1.果胶酶在果汁生产中的作用 (1)果胶酶的作用:分解细胞壁及胞间层的主要成分——果胶,使其变成可溶性的半乳糖醛酸,易于榨取果汁。 (2)酶的活性与影响酶活性的因素 ①酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。酶反应速度用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量表示。 ②影响酶活性的因素有温度、pH和酶的抑制剂等。 2.探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 (1)加酶洗衣粉中含有的常用酶制剂:蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶等。 (2)实验过程要遵循单一变量原则和对照原则,严格控制无关变量。同时还要考虑到酶的专一性和洗涤成本等问题。3.多聚酶链式反应扩增DNA片段 细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)比较4.血红蛋白的提取和分离 (1)实验原理:依据蛋白质的各种特性可以将不同种类的蛋白质分离。 (2)常用方法 ①凝胶色谱法:根据相对分子质量的大小分离蛋白质。 ②电泳:利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身大小、形状的不同产生不同的迁移速度,由此将各种分子分离。 (3)蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 5.酵母细胞的固定化 (1)固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术,包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。 (2)配制海藻酸钠溶液时要用酒精灯加热,加热时要用小火间断加热,反复几次,直到海藻酸钠溶化为止。(3)固定化酶和固定化细胞技术的比较六、DNA和蛋白质技术 1.DNA的粗提取与鉴定 (1)基本原理 ①DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。 ②DNA不溶于酒精溶液。 ③DNA不被蛋白酶水解。 ④DNA可被二苯胺染成蓝色。 (2)主要步骤:选取材料→破碎细胞,获取含DNA的滤液→去除滤液中的杂质→DNA的析出与鉴定。 (3)注意事项 ①选择动物细胞时,细胞比较容易破碎,选择植物细胞时则要先溶解细胞膜(如加洗涤剂、研磨等)。 ②以哺乳动物红细胞为材料时,需向血液中加入柠檬酸钠抗凝。 ③二苯胺需现配现用。热点考向探究【解析】在酵母细胞的固定化过程中,刚溶化好的海藻酸钠溶液要冷却至室温才能加入已活化的酵母细胞,否则会影响酵母细胞的活性,A项错;将海藻酸钠慢慢滴加到配制好的CaCl2溶液中,液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠,B项正确;在发酵过程中,搅拌的目的是使培养液与酵母细胞更充分地接触,C项正确;将固定好的酵母细胞用蒸馏水冲洗2~3次后,再将葡萄糖溶液转入锥形瓶,加入固定好的酵母细胞,置于适宜条件下发酵,D项正确。 【答案】A微生物培养的基本操作【解析】本题考查微生物培养的无菌操作、活菌计数等技术。(1)大肠杆菌是常用的实验材料,其培养过程需要适宜的温度、酸碱度等条件。 (2)微生物的无菌培养是最关键的环节,需针对不同的操作涉及对象采用不同的消毒、灭菌措施。 (3)待测样品的稀释度不能太高或太低,否则会导致计数的不准确。 (4)不同的微生物具有不同的菌落特征,是判断微生物类别的依据之一。 (5)培养基的无菌是微生物培养的前提,可通过直接培养空白培养基的方法来判断其是否被污染。 (6)实验结束后,为避免微生物污染环境、感染操作者,需将含有微生物的培养基、器皿等进行严格灭菌。【答案】(1)温度酸碱度易培养生活周期短 (2)灭菌消毒损伤DNA的结构 (3)比例合适 (4)鉴定(或分类) (5)将未接种的空白培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是