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桔梗提取物中桔梗皂苷D的反相高效液相色谱检测方法研究
【摘要】目的建立桔梗提取物中桔梗皂苷D的高效液相色谱检测方法。方法采用RP－HPLC法、蒸发光散射检测器测定桔梗皂苷D含量。色谱柱为AgilentODS，流动相为乙腈∶％乙酸溶液＝28∶72，流速ml/min；检测器为WatersELSD2420。结果桔梗皂苷D在625～mg/ml范围内与峰面积具有良好的线性关系，r=6。桔梗皂苷D平均回收率为％，RSD为％。结论通过6批不同的桔梗提取物的含量测定，证明该方法简便、准确、可靠。【关键词】桔梗提取物；桔梗皂苷D；反相高效液相色谱法；蒸发光散射检测Abstract：ObjectiveToestablishanRP-HPLCdeterminationmethodoftheplatycodinDinPlatycodonGrandiflorumextracts.MethodsPlatycodinDcontentwasdetectedbyhighperformanceliquidchromatogram-ELSDetector.AgilentHypersilODS(mm×250mm，5μm)wasused,mobilephasewasV(acetonitrile)∶V(％aceticacid)=28∶72atml/minspeed.ELSD2420detectorwasusedforqualitativeandquantitativeanalysisinexternalstandardDhasgoodlinearrelationinmg/ml－mg/ml.r=TherecoveryofplatycodinDwas%,RSDwas%.ConclusionThecontentofplatycodinDinsixdifferentgroupsofsamplesisdetermined.Theobtainedresultsindicatethatthismethodissimple,accurate,andcredible.Keywords：Platycodongrandiflorumextracts；PlatycodinD；HPLC-ELSD；Analyticmethod在我国，以中药材为原料的中药提取物被用于医疗或保健食品已形成了一定的生产规模。规范中药提取物的质量对中药产业的发展至关重要，大量中药提取物还有待制订国家标准或行业标准［1］。桔梗提取物具有多种生物活性和很好的药用价值［2］，是市场畅销的中药提取物之一，但现无严格的质量标准。桔梗总皂苷是桔梗提取物的主要药效成分，其中桔梗皂苷D含量最高，药效较确定［3］。2005年版《中国药典》中桔梗药材是以总皂苷为指标，采用重量法测定总皂苷含量［4］，精确性较低。许传莲等［5～7］用高效液相色谱紫外检测器检测桔梗药材中桔梗皂苷D，但桔梗皂苷D无共轭结构,无强的发色基团,末端吸收检测干扰较大。目前尚没有报道检测桔梗提取物中桔梗皂苷D的相关文献。本文以桔梗皂苷D为指标，采用HPLC-ELSD为检测方法，对桔梗提取物中的桔梗皂苷D进行了分析研究。1仪器与试药1仪器：Waters高效液相色谱仪［Waters515高压泵，Waters2420蒸发光散射检测器，Empower数据处理系统］，SIGMA3K15型离心机，MettlerToledoAG135型电子天平，SC5202型超声波清洗器。2试药桔梗药材由亳州济人药业有限公司提供。桔梗提取物由本中心按拟议中的标准生产工艺制备。桔梗皂苷D对照品购于吉林农业大学药学院。乙腈为色谱级，水为重蒸水。2方法与结果色谱条件色谱柱为AgilentHypersilODS柱，流动相为乙腈∶％乙酸＝28∶72，柱温为25℃，流速ml/min。ELSD参数：雾化器温度36℃，漂移管温度75℃，载气压力25psi。理论塔板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于3000，桔梗皂苷D的峰与其他峰能达到基线分离，且出峰时间适宜，峰形较好。对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的桔梗皂苷D对照品mg，置10ml容量瓶中，加乙腈∶％乙酸(28∶72)溶液至刻度，摇匀，即得mg/ml的对照品溶液。供试品溶液的制备取桔梗提取物干粉50mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇约50ml，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，用适量水溶解，然后用乙醚萃取1次，弃去醚层，水层用水饱和正丁醇萃取3次，合并醇液，蒸干，用5ml甲醇复溶，溶液离心处理，微孔滤膜过滤，取滤液，即得。线性关系的考察精密吸取对照品溶液逐级稀释成，，，，mg/ml5个不同浓度的对照品溶液，按上述条件进样，进样量10μl/次，测定其峰面积，然后以桔梗皂苷D浓度的自然对数为横坐标，峰面积的自然对数为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为Y＝