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正交优选连翘中齐墩果酸的提取工艺
【摘要】目的优选连翘中齐墩果酸的提取工艺。方法以齐墩果酸含量为指标，采用L9(34)正交设计实验，考察了提取时间、乙醇浓度、料液比对提取率的影响,优选出合理的提取工艺。用高效液相测定齐墩果酸的含量。结果优选出齐墩果酸的最佳提取工艺条件是：超声提取3次，40min/次，90%乙醇溶液，料液比1∶12。结论采用此工艺提取方法快速、简单，可以为进一步研究连翘提供参考。【关键词】正交实验齐墩果酸连翘Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionconditionofoleanolicacidfromFructusForsythiae．MethodsWitholeanolicacidasindex，extractiontime、concentrationofalcoholandamountofalcoholandwereevaluatedbyL9(34)orthogonaldesignmethod．HPLCwasusedtoanalyzethecontentofoleanolicacid．ResultsTheoptimumextractionconditionwasdescribedasfollow：ultrasonicextraction3times(once40min)，90%ethanolsolution,and12-foldsolvent．ConclusionTheoptimizedtechnologyisquickandsimple，andcanbeusedfortheoreticalbasic．Keywords：Orthogonaldesign;Oleanolicacid;FructusForsythiae中药连翘是木犀科连翘属植物的干燥果实，主产山西、河南、陕西,有广谱的抗菌作用，如对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌等有不同程度的抑制作用，有镇吐、解热、抗炎以及保肝作用，含有连翘苷、牛蒡子苷、齐墩果酸等［1］。齐墩果酸具有降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性、促进细胞再生、防止肝硬化、抗炎等作用，是治疗肝炎的有效成分。近年有关研究证明其有抗癌活性。《中国药典》［2］对连翘中的连翘苷进行了测定；孙国祥等［3］对连翘的HPLC指纹图谱进行了研究；张杲等［4］对不同采收期连翘进行了HPLC指纹图谱研究；邹盛勤［5］对不同采收期连翘中的熊果酸和齐墩果酸含量进行了测定；张涛等［6］对连翘不同炮制品中连翘苷进行了HPLC测定。本工艺以齐墩果酸的含量作为考察指标，采用单因素实验设计与正交实验设计相结合，用HPLC测定，优选连翘中齐墩果酸的提取工艺，以期为进一步研究连翘奠定基础。1仪器与试药1仪器日本Hitach公司高效液相色谱仪；L-2400型紫外检测器；GoldSpectrumlab54紫外可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；KQ2200E型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；PH-030干培两用箱；RE-52AA型旋转蒸发器；Sartorius十万分之一电子天平(德国)。2试药药材连翘购自江西省药材公司(产地山西)，经江西医学院冯江教授鉴定为正品连翘；齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检验所提供；甲醇为色谱纯,超纯水；其他试剂均为分析纯。2方法与结果色谱条件KromasilC18柱；流动相为甲醇-水-%冰醋酸；柱温：30℃；流速1mL/min；检测波长215nm。检测波长的确定取对照品溶液，经紫外分光光度计在200～500nm范围内扫描得知，对照品溶液在203，207，210nm等处有吸收，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰,因此选择最大的215nm作为测定含量的吸收波长。对照品溶液的制备取对照品105℃恒温干燥至恒重，精密称取mg齐墩果酸对照品，置10ml容量瓶中，用流动相溶解，超声5min，定容至10ml，得到mg/ml的对照品溶液。标准曲线和线性范围的考察依次精密吸取对照品溶液，，2，3，4ml后，置10ml容量瓶中，再加10ml流动相溶解稀释，分别取10μl进样3次，记录峰面积，以峰面积值(Y)对齐墩果酸的浓度(X)进行线性回归，得回归方程为Y=3980023X-28536,r=8。结果表明齐墩果酸在～mg/ml范围内线性关系良好。单因素实验提取时间对连翘中齐墩果酸提取量的影响准确称量连翘1g共15份，分成5组，每组实验重复3次，分别加12倍量的90%乙醇超声提取，5组提取时间分别为20，30，40，50，60min，分别测定齐墩果酸的含量,结果：40min时提取的含量最大，40min之前或之后提取量较小。乙醇浓度对连翘中齐墩果酸提取量的影响准确称量连翘1g共12份，分成4组，每组实验重复3次,分别加12倍量的60%，70%，80