[指南]荧光素fitc标记抗体的方法(完整版).doc
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荧光素FITC标记抗体的方法.doc
荧光素FITC标记抗体的方法当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般最多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FITC-N=C=S+N-H2-蛋白质→FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体,也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark等(196
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免疫学检测方法荧光免疫技术——抗原抗体反应与荧光标记技术结合,对抗原或抗体进行定性、定位或定量检测抗核抗体的定义ANA(antinulearantibody)定义ANA细胞靶抗原成份模式图推荐采用以HEp-2细胞(HumanEpithelialCells,人喉癌上皮细胞株)为底物的间接免疫荧光法(IndirectImmunoFluorescenceassays,IIF)试剂与器材包被组织切片的生物薄片加样板上加入FITC标记20ul二抗后,盖板注意事项注意事项细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期特点:胞浆颗粒细且
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会计学实验材料实验原理实验方法或步骤结果多聚鳌合物酶法HRP---多聚化合物---抗体一、Epos法Enhancedpolymerone-stepstaining原理:采用一种具有惰性的多聚化合物作为骨架,将特异性抗体和HRP,同时标记在多聚合物分子上,形成HRP---多聚化合物---特异性抗体。步骤:一步法特点:快速,简便,特异性强,敏感性高但商品化种类不全,价格昂贵二、EnVision法(或PowerVison)EnhancedLabelledPolymerSystem原理:HRP---多聚化合物--
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HRP标记抗体的方法(戊二醛二步法和简易过碘酸钠法)一、戊二醛二步法戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。二、简易过碘酸钠法本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再与Ig上的氨基相结合,所获酶标记抗体的产率高,将近70%的HRP和Ig结合,99%的Ig与酶结合,酶与Ig的活性无重大损失,是目前最常用的方法。1.原理戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和HYPERLINK"http://www.ebioe.com/