酶的分离纯化1.ppt

第三章酶的分离纯化内容细胞结构与酶分布第一节概述5.酶的提纯6.酶的纯度检验酶的提取、分离纯化技术路线二、酶纯化过程的三个阶段第二节破碎与提取细胞破碎
许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。

1）机械破碎
2）物理破碎
3）化学破碎
4）酶解破碎机械破碎二、抽提酶的主要提取方法需要考虑的因素纯化方法的选择第三节沉淀分离1.盐析法2)产生盐析作用的原因提高盐浓度增加蛋白质的溶解度----盐溶3)盐析剂的选择硫酸铵沉淀优点饱和度调整4)影响盐析的因素5)盐析法的特点2.有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法应考虑的因素优缺点第四节层析分离1.2发展1.3基本原理1.4分类层析分离方法二、吸附层析

利用吸附剂对不同物质的吸附力不同，是应用最早的层析技术。三、分配层析：各组分在两相中的分配系数不同薄层层析四、凝胶过滤(层析)法1.原理常用的凝胶：
葡聚糖凝胶
琼脂凝胶与琼脂糖凝胶
聚丙烯酰胺凝胶2.胶的选择聚丙烯酰胺凝胶分配系数五、离子交换层析1.基本原理2.离子交换剂的分类离子交换剂的选择依据运用强型和弱型交换剂的选择六、亲和层析法常用的亲和介质及专一性配体根据欲分离组分与配基的结合特性,亲和层析可以分为：
共价亲和层析
疏水层析
金属离子亲和层析
免疫亲和层析
染料亲和层析
凝集素亲和层析第五节电泳1分类区带电泳分类2影响电泳速率的因素2影响电泳速率的因素二、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分类不连续凝胶电泳浓缩效应三、SDS-PAGE四、等电聚焦电泳第六节其它分离方法离心分离方法过滤与膜分离过滤的分类及其特性膜分离：借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状的物质颗粒或分子进行分离的技术。
使用的薄膜主要是由丙烯腈、醋酸纤维素、赛璐玢以及尼龙等高分子聚合物制成的高分子膜。根据膜材料和不同进料液的特性，商品应用的膜产品通常采取如下几种结构形式：管式；中空纤维；卷式；平板式。膜技术
四种常用膜分离过程的截留特性第七节酶的浓缩、干燥与结晶为便于保存、运输和使用，一般都必须进行干燥。常用的干燥方法有：

真空干燥
冷冻干燥
喷雾干燥
气流干燥
吸附干燥酶的结晶是酶分离纯化的一种手段。不仅为酶的结构与功能等的研究提供了适宜的样品，而且为较高纯度的酶的获得和应用创造了条件。