内容提供者
Westernblot实验技术培训课件.ppt
2024-09-10
10金币
1.4MB
27页
13****54
实名认证
内容提供者
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10
亲，该文档总共27页，到这已经超出免费预览范围，如果喜欢就直接下载吧～
相关资料
Westernblot实验技术培训课件.ppt
Westernblot实验技术定义：WesternBlot基本原理WesternBlot一般流程蛋白样品的制备裂解液SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺SDS配胶的Tris缓冲液TEMED过硫酸铵(时间)Tris-甘氨酸电泳缓冲液凝胶浓度与蛋白分离范围10安装玻璃板12转膜不能有气泡不要污染膜的表面注意正负极冰浴冷却半干转封闭一抗、二抗孵育二抗与底物反应显色WesternBlot常见问题分析SDS-PAGE电泳条带比正常的窄？“微笑”或“倒微笑”条带？转膜及抗体检测背景太高没有阳
2024-09-10
10
1.4MB
Westernblot实验技术.doc
Westernblot试剂配制1.30%丙烯酰胺：29.2g丙烯酰胺用温热（利于溶解双丙烯酰胺）的去离子水（超纯水）溶后定容到100ml，过滤后于棕色瓶中储存0.8gN,N’-亚甲双丙烯酰胺注意：丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反映是光催化或碱催化的，故应核算溶液的pH值不超过7.0。这一溶液置棕色瓶中贮存于4℃，每隔几个月须重新配制。小心：丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤。2.10%SDS：称5gSDS，超纯水溶解后，定容到50ml。贮存液保存
2024-09-18
10
235KB
Westernblot实验步骤.pptx
Westernblot实验技术Westernblot原理WesternBlot信号放大基本原理WesternBlot一般流程贴壁细胞：细胞可以在培养皿里裂解，洗掉培养基，PBS洗2~3次，加入RIPA裂解液裂解，以可以将细胞消化下来，离心，PBS洗2~3次，加入RIPA冰上裂解液裂解30分钟（可提高蛋白浓度）。按6孔板100-200微升/孔的比例加入PIPA(可根据细胞多少调节裂解液体积）,4度，12000转，离心15分钟，收集上清.悬浮细胞:收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS洗2-3遍，按6孔板加入
2024-03-19
10
68KB
Westernblot实验介绍及流程.pptx
会计学Bio-rad垂直电泳、电转装置电泳槽玻璃板、梳子、加样校准架等电转移槽切胶板、黑白夹板、海绵垫等电泳仪Westernblot是利用已知的特异性抗体与抗原（即组织细胞中的目的蛋白）能特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂（如酶、金属离子、同位素）显示一定的颜色或发光来对组织细胞内目的蛋白定性及半定量的研究。Westernblot检测蛋白表达实验流程SDS电泳技术首先在1967年由Shapiro建立,1969年由Weber和Osborn进一步完善。SDS-聚丙烯酰胺（PAG
2024-09-20
20
381KB
Westernblot实验技术专题知识.pptx
Westernblot试验技术定义：WesternBlot基本原理WesternBlot普通流程蛋白样品制备裂解液SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺SDS配胶Tris缓冲液TEMED过硫酸铵(时间)Tris-甘氨酸电泳缓冲液凝胶浓度与蛋白分离范围Westernblot实验技术专题知识安装玻璃板Westernblot实验技术专题知识转膜转膜不能有气泡不要污染膜表面注意正负极冰浴冷却半干转封闭一抗、二抗孵育二抗与底物反应显色WesternBlot常见问题分析SDS-PAGE电泳条带
2024-01-11
14
1.7MB