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第三章消毒(xiāodú)与灭菌消毒:应用物理或化学方法杀灭物体中的病原微生物,并不一定(yīdìng)能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。 灭菌:应用物理或化学方法杀灭物体中所有的病原微生物、非病原微生物及其芽胞、孢子的方法。 消毒只要求达到无传染性的目的,对非病原微生物及其芽胞、孢子并不要求全部杀死。防腐:应用各种化学药品或物理方法防止或抑制微生物生长繁殖的方法。 无菌法:采取防止或杜绝一切细菌进入动物机体或其他物体的方法。 以无菌法进行的操作称无菌操作。 滤过除菌:指液体或气体通过滤过作用(zuòyòng)除去其中所存在的细菌。第一节物理因素(yīnsù)对微生物的影响一、温度对细菌(xìjūn)的影响 按细菌对温度的适应可分为: 嗜冷菌、嗜温菌、嗜热菌 按温度对细菌的影响有: 最适温度、最高温度、最低温度1.低温对细菌的影响 大多数微生物对低温具有很强的抵抗力. 环境温度<最低生长温度:代谢活动降低,最后生长繁殖停滞,存活较长时间。 一般细菌菌种在冰箱5-10℃低温下保存(bǎocún)。但也有些细菌对低温持别敏感,在冰箱内保存(bǎocún)比在室温下保存(bǎocún)死亡更快。如禽多杀性巴氏杆菌。冷冻干燥法:将保存物置玻璃容器内,在冷冻真空干燥器中迅速冷冻,然后抽去容器内的空气,使冷冻物中的水分在真空下直接升华而逐渐干燥,最后在真空下将玻璃容器焊封严密(yánmì)。在这样的冻干状态下,细菌及生物制剂可保存数月至数年而不丧失其活力。 冷冻干燥(冻干)法是保存菌种、疫苗等良好方法。补充:为什么冷冻保存(bǎocún)细菌时,温度必须迅速降低?补充:反复冻融对微生物活力(huólì)的影响2.高温对细菌的影响(yǐngxiǎng) 高温对细菌有明显的致死作用,是最常用的有效的灭菌方法。 其原理多认为热力使菌体蛋白质变性或凝固,酶失去活性,导致细菌死亡。干热灭菌法(火焰灭菌和热空气灭菌) ①火焰灭菌法主要用于接种针、接种环、试管口等的灭菌。 ②热空气灭菌法用加热空气使灭菌物品温度升高到160℃并维持1~2小时以进行灭菌的方法。主要用于干燥(gānzào)的玻璃器皿如试管、吸管、玻璃注射器、培养皿等的灭菌。干热灭菌注意事项: 1.灭菌结束后,切记(qièjì)不可立即打开箱门,以免着火; 2.灭菌物品不要堆放太紧,以免升温不均匀; 3.灭菌时,要使温度逐渐上升,切忌太快。以免造成玻璃器皿的炸裂; 4.不能耐受160℃高温的物品切勿干热灭菌。湿热灭菌法: 1.煮沸灭菌 10-20min杀死所有(suǒyǒu)细菌繁殖体;加入1%碳酸钠或2-5%石炭酸,灭菌的效果更好。2.巴氏消毒法 用于葡萄酒、啤酒及牛乳等的消毒(不损失营养成分)。 低温维持巴氏消毒法:61-63℃(63-65),30min,然后迅速冷却至10℃左右。 高温(gāowēn)瞬时巴氏消毒法:71-72℃,15s,然后迅速冷却至10℃左右。 超高温巴氏消毒法:使鲜牛奶通过温度不低于132℃的管道1-2s,然后迅速冷却至10℃左右(在常温下的保存期可达半年)。3.流通蒸汽灭菌法 100℃的蒸汽维持30min(不能杀死芽胞) 4.高压(gāoyā)蒸汽灭菌 在一个加有少量水的密闭的金属容器内,通过加热来加大蒸汽压力,以提高温度,达到在短时间内完全灭菌的效果。①高压蒸汽灭菌(mièjūn)时压力与温度的关系 10磅(磅/平方英寸),115℃, 15磅,121℃, 20磅,126℃。②高压蒸汽灭菌的适用范围 适用于培养基、生理盐水、某些缓冲液、针剂(zhēnjì)、玻璃器皿、金属器械、工作服等。 血清、血液、酶、氨基酸等,只能采用过滤除菌的方法。 糖类溶液或含糖的培养基可用10磅15~20min灭菌,若压力、温度过高则可使培养基颜色变深。③高压蒸汽灭菌时注意事项 排冷空气 灭菌前要检查(jiǎnchá)灭菌器内水位是否正常。 灭菌物品不要互相挤压过紧,以保证蒸汽通畅,使所有物品的温度均匀上升。 不耐热的塑料等材料切勿高压灭菌。高压(gāoyā)蒸汽灭菌锅构造1、加水至止水线; 2、灭菌物品包裹好; 3、开启放气阀; 4、加热(jiārè)排气; 5、达到预定表压,开始计时; 6、关闭热源,当压力降至0.05MPa时,缓慢开启放气阀。热力(rèlì)灭菌法二、光线对细菌的影响 可见光线的影响:肉眼(ròuyǎn)可见的光线对细菌一般无多大影响。但长时间暴露于光线之中,则细菌的代谢与繁殖亦可受到影响。故培养细菌及保存菌种,均应置于阴暗之处。 日光是有效的天然杀菌因素。 如细菌在直射日光下照射半小时到数小时以上即可死亡,芽胞对日光照射的抵抗力比繁殖体大得多,往往需经20小时才能死亡。 阳光暴晒消毒(xiāodú) 在实践中,日光对被污染的土壤、牧场、畜舍垫料及用具等的消