剑麻不同组织RNA提取方法比较分析.pdf

分子植物育种，2010年，第8卷，第1期，第201-208页
MolecularPlantBreeding,2010,Vol.8,No.1,201-208

技术改进
UpgradedTechnology
剑麻不同组织RNA提取方法比较分析

张燕梅周文钊*李俊峰

中国热带农业科学院南亚热带作物研究所,湛江,524091
*通讯作者,[e-mail]

摘要本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料，比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓
冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ
法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果，结果表明：不同
缓冲液组成对实验结果影响很大，其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方
法提取的RNA差异明显，其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提
取，不仅产率高，而且的质量也较好，无污染，分别为和，分
RNADNAOD260/OD2801.87、2.041.98OD260/OD230
别为2.46、2.10和2.15，产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足
下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。
关键词剑麻,RNA提取,优化后的改良CTABⅠ法,茎尖,花,成熟叶片
ComparativeAnalysisofDifferentRNAIsolationMethodsforDissimilar
TissuesofSisal

ZhangYanmeiZhouWenzhao*LiJunfeng
SouthSubtropicalCropsResearchInstitute,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Zhanjiang,524091
*Correspondingauthor,[e-mail]
DOI:10.3969/mpb.008.000201

AbstractInthisresearch,shoot-tip,flowerandmaturedleafofsisalwereusedasexperimentmaterialsforRNA
isolation.EffectsonisolatingRNAwithfourRNAisolationbuffers,whichareSDSⅠ,SDSⅡ,CTABⅠ,and
CTABⅡ,andsixisolationmethodsincludingRNeasyPlantMiniKitofQiagen,SVtotalRNAisolationsystemof
Promega,modifiedTrizolreagent,modifiedSDSⅠ,modifiedCTABⅠ,andoptimizingmodifiedCTABⅠarean-
alyzedandcompared.TheresultsshowedthatdifferentRNAisolationbuffershadgreateffectontheexperimental
result,desirableyieldandqualityRNAcanbeextractedwithCTABⅠbuffer,Thereweresignificantdifferencea-
mongtheRNAisolatedbyusingthesixisolationmethods.andtheoptimizingmodifiedCTABⅠwasconsidered
tobethemostfavorablemethodsforRNAisolationfromallshoot-tip,flowerandmaturedleafofsisa,RNAwith

highyieldandquality,andhadnotDNAcontaminationcouldbeobtained,theOD260/OD280ofshoot-tip,flowerand

maturedleafwere1.87,2.04and1.98respectively,OD260/OD230were2.46,2.10and2.15,respectively,andthe
yieldsofflower,shoot-tipandmaturedleafwere65.8μg/gFW,84.7μg/gFW,and42.3μg/gFWrespectively.
RNAisolatedbythismethodcouldbeusedtofurtherstudyof