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产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定

摘要：学习和掌握筛选菌株的方法，学习和掌握细菌的生理生化鉴定方法。通过观察和比较分离出来细菌。本实验通过从面粉中分离产淀粉酶细菌以及已经培养的二种微生物，在同一培养基同时培养，最后进行不同的生理生化对比实验。通过观察、鉴定得出这三类微生物不同的生理生化特征。
关键字：微生物、分离、培养、鉴定
前言：淀粉酶是一种十分重要的工业酶，广泛应用于食品加工、粮食加工、酿造、发酵及医药行业。产淀粉酶菌株普遍存在于自然界，目前商业生产投入的产淀粉酶菌株大都是从自然界提取的野生菌株加以改良后得到的。为了要扩大培养和改进菌株，就需要对其进行生理生化实验，了解产淀粉酶菌株的生理特性，为鉴定作参考。
1.实验仪器与试剂
1.1主要仪器
高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳等
1.2主要试剂
牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、蔗糖、琼脂、NaCl、0.04%溴甲酚紫、（NH3）2SO4、CaCl2、KH2PO4、MgSO4•7H2O、NaOH溶液（1mol/L）、过氧化氢溶液、吲哚试剂、乙醚。
2.实验步骤
2.1培养基的配制
2.1.1肉膏蛋白胨培养基的配制
培养基成分
牛肉膏0.3g
淀粉1g
蛋白胨1g
NaCl0.5g
琼脂1.5g
水100mL
pH7.2~7.4
配制方法
（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl等的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。
（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。
（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/LNaOH溶液调pH至7.2~7.4。
（5）分装、加塞、包扎。
（6）高压蒸汽灭菌20分钟。
待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固。
2.1.2生理生化实验培养基的配制
2.1.2.1葡萄糖发酵产酸实验
培养基成分
葡萄糖1g
蛋白胨0.2g
NaCl0.5g
0.04%溴甲酚紫1ml
KH2PO40.02g
水100mL
pH7.4

配制方法
（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl等的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水。
（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（3）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/LNaOH溶液调pH至7.4。
（4）各5ml装入三支试管中。
（5）加塞、包扎。

2.1.2.2吲哚实验
培养基成分
蛋白胨1g
NaCl0.5g
水100mL
pH7.2

配制方法
（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水。
（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（3）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/LNaOH溶液调pH至7.2。
（4）各5ml装入三支试管中。
（5）加塞、包扎。

2.1.2.3唯一碳源实验
培养基成分
蔗糖5g
葡萄糖5g
KH2PO40.5g
（NH3）2SO42g
MgSO4•7H2O0.2g
CaCl20.1g
水1000mL
pH7.2

配制方法
（1）称量及溶化：分别称取蔗糖和葡萄糖的所需量，置于两个烧杯中，加入其他相同成分及所需水量的2／3左右的蒸馏水。
（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
（3）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/LNaOH溶液调pH至7.2。
（4）各5ml装入三支试管中。
（5）加塞、包扎。
2.2微生物的筛选和生理生化实验
2.2.1细菌筛选
（1）在两个培养皿（1号、2号）相同的位置中接种9种菌株，在另一个培养皿（3号）中撒入含有产淀粉酶菌株的面粉。恒温培养1d。
（2）在1号培养皿中滴入碘液，找出有水解圈的菌株，在2号培养皿中挑出对应3种菌株接种在4号培养皿中各四个。
（3）在3号培养皿中滴入碘液，找出有水解圈的菌株，挑出接种到4号培养皿。
（4）恒温培养1d。
2.2.2生理生化实验
2.2.2.1过氧化氢酶实验
（1）在三个载玻片上各滴一滴过氧化氢。
（2）挑取3种菌种（必须有面粉产淀粉酶菌株）分别放在载玻片上，涂匀后观察是否产生气泡。
2.2.2.2吲哚实验
（1）在三个试管中各接种一种菌株（必须有面粉产淀粉酶菌株），恒温培养1d。
（2）在试管中各加1ml乙醚充分震荡是吲哚溶于乙醚中。
（3）静置，分层后，沿管壁加入吲哚试剂，观察是否呈红色。
2.2.2.3唯一碳源实验
（1）在三个蔗糖试管中各接种一种菌株（必须有面粉产淀粉酶菌株），恒温培养1d。
（2