相关基因 TAPRR73 的克隆及生物信息学分析.ppt

相关基因（TaPRR73）的克隆及生物信息学分析光周期是植物适应环境的一种现象，能够通过日照长度调控植物的抽穗期。聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)是最常见的应用于基因载体的阳离子聚合物。本文设计、合成、表征了两种分别带有o-胺甲基和p-胺甲基苯硼酸基团的PEI(PEI1800-o-BA和PEI1800-p-BA)。MTT毒性测试结果表明这两种PEI衍生物的细胞毒性比25KDaPEI小很多。而且，两种材料在不同细胞中的毒性表现不同，对于HeLa细胞，PEI1800-p-BA的毒性比PEI1800-o-BA小，PEI1800-p-BA浓度为1mg/mL时细胞存活率仍大于50%；小麦是严格的长日照作物，且种植面积广泛，研究小麦中的光周期基因对提高小麦品种对不同光照条件的适应性，提高小麦产量等具有重要意义。而PEI1800-o-BA的IC50约为0.22mg/mL。相反地，对于HepG2细胞，PEI1800-p-BA的毒性较PEI1800-o-BA大，其IC50约为0.22mg/mL，而PEI1800-o-BA浓度为1mg/mL时细胞存活率仍有50%左右。荧光素酶基因转染实验表明PEI-BA是一种有效的非病毒基因传递载体，其在HepG2和HeLa细胞上的转染效率皆比25KDaPEI高。在表面富含SialylLewisX糖基的HepG2细胞中，本研究同源克隆了小麦的光周期相关基因TaPRR73，通过测序得到该基因在中国春上的gDNA及cDNA全长序列。PEI1800-p-BA/DNA的转染效率比25KDaPEI/DNA高约5-10倍；在HeLa细胞上PEI1800-o-BA较1800DaPEI要高2-3个数量级，在N/P=10-20时比25KDaPEI的转染效率也要高出5-10倍。激光共聚焦实验也显示两种材料在不同细胞上的基因传递效果不同。这些结果表明苯硼酸对材料的转染效率有着相当重要的作用，而且不同类型苯硼酸修饰的PEI显示出一定的细胞选择性。根据A、B、D三个基因组序列存在的插入缺失设计染色体定位引物，利用小麦缺体-四体系列将该基因定位在小麦第四同源群上。本文在室温下利用溶剂蒸发法成功合成了一个新的Cr(III)的单核单分子配合物：(HAbim)3[Cr(C2O4)3]o3.75H2O(1)(Abim=2-氨基苯并咪唑，H2C2O4=草酸)。在配合物1中Cr(III)离子是六配位的具有变形的八面体结构。在晶体结构中的分子间有许多的N-H…O和O-H…O氢键，由于这些氢键的存在，导致该晶体呈现一个三维超分子结构。磁性研究表明该配合物1具有铁磁行为，其摩尔磁化率遵循居里外斯定律，居里常数C=1.44cm3Kmol-1，外斯常数θ=+18.6K。交流磁化率测试表明该配合物具有磁弛豫现象。对该基因进行结构预测，发现该基因具有PRRs家族的两个保守域:6-甲氧基靛红是一类重要的有机合成中间体，已经广泛的用来合成各种天然产物以及一些具有生理活性的药物分子；而文献中报道的对其合成方法产率很低。本文通过探讨Sandmeyer靛红合成法的可能机理，对6-甲氧基靛红的合成工艺进行了系统的考察优化。具体包括反应温度、酸的种类和当量等。通过一系列研究，得到了最佳的反应条件，即采用浓硫酸和无水乙醇混合的溶剂体系，在100摄氏度条件下可以得到最佳结果。在该条件下，反应操作简便，可以在实验室大规模制备，产率可达90%。受体结构域(Pseudo-receiverdomain）和保守结构域CCT，说明该基因结构比较保守，可能在调节小麦光周期中发挥功能。