一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108333371A(43)申请公布日2018.07.27(21)申请号201810135472.6(22)申请日2018.02.09(71)申请人广州源起健康科技有限公司地址510530广东省广州市广州高新技术产业开发区瑞泰路2号(72)发明人李根平(74)专利代理机构广州市深研专利事务所44229代理人姜若天(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒(57)摘要本发明公开了一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，包括包被NGAL单克隆抗体的免疫磁珠、NGAL校准品溶液、铕标记的NGAL单克隆抗体溶液、清洗液和增强液。所述的包被NGAL免疫磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠与NGAL单克隆抗体共价偶联物。本发明的灵敏度高，NGAL的灵敏度为1ng/mL，血清(浆)、尿液样本不需要稀释；检测时间短，30min出报告；样品需求量少，一次上样只需50μL；配套全自动时间分辨免疫分析仪，操作简单，无人为误差并节省人力。CN108333371ACN108333371A权利要求书1/1页1.一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于包括包被NGAL单克隆抗体的免疫磁珠、NGAL校准品溶液、铕标记的NGAL单克隆抗体溶液、清洗液和增强液。2.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述的包被NGAL单克隆抗体的免疫磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠与NGAL单克隆抗体共价偶联物，其中所使用的磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、链酶亲和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种。3.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁珠的制备方法为：吸取羧基磁珠到离心管中，将离心管放置在磁力架中，利用磁力架进行磁珠和缓冲液的分离，用0.05MpH6.0的2-（N-吗啡啉）乙磺酸洗涤磁珠3~5次；向上述洗涤好的磁珠中加入0.05MpH6.0的2-（N-吗啡啉）乙磺酸，加入20mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液和20mg/mLN-羟基琥珀酰亚胺，室温震荡反应；将活化好的磁珠置于磁力架上，弃上清，收集活化好的磁珠；加入单克隆抗体，室温持续旋转孵育3~5小时；上述磁珠置于磁力架上，弃上清，收集免疫磁珠。4.如权利要求3所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁珠还加入含有2%BSA0.1MpH8.0的Tris-HCl缓冲液，重悬磁珠，封闭未偶联单克隆抗体的活化羧基位点，反应30~60分钟。5.如权利要求4所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述免疫磁珠置于磁力架上，弃上清，加入免疫磁珠保存液；所述的保存液为含5%（w/v）BSA，1%（w/v）海藻糖，0.1%（v/v）Tween-200.05MpH8.0的Tris-HCl缓冲液。6.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述的铕标记的NGAL单克隆抗体溶液的制备方法为：按照NGAL抗体与Eu3+的质量比为5:1，将DTTA-Eu作为标记物，在0.05MpH8.5的碳酸盐缓冲液下，加入DTTA-Eu与NGAL单克隆抗体，混合后溶于0.05MpH8.5的碳酸盐缓冲液，室温震荡过夜；用葡聚糖凝胶柱纯化后收集峰管；将上述制备好的铕标抗体稀释，使NGAL抗体的终浓度为0.0045~0.0080g/L。7.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述清洗液的配方为：0.8~1.5%Tween-20，0.02%Proclin300，pH7.2~7.50.01MTris-HCl缓冲液。8.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述增强液的配方为：0.03%乙酸钠、0.0002~0.0009%β-NTA、0.0024%TOPO、0.08%醋酸、0.1%无水乙醇、0.01%的TritonX-100的水溶液。9.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测NGAL试剂盒，其特征在于，所述NGAL校准品的制备方法为：用含1.5%Tween-20，0.02%Proclin300，pH7.50.02MTris-Hcl缓冲液将NGAL抗原稀释至0、10、100、500、1000、1500ng/ml。2CN108333371A说明书1/6页一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测N