第7次课 2 学时.doc

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第7次课2学时
上次课复习：
提问练习题本次课题（或教材章节题目）：第三章蛋白质第一节氨基酸（2）
第三节肽学要求：
1.掌握Sanger试剂和Edman反应；侧链巯基的化学反应；了解其它的化学反应；
2.掌握氨基酸的光学活性和光谱性质；
3.掌握氨基酸混合物的分离原理及方法：纸层析、柱层析、离子交换层析重点：Sanger试剂和Edman反应；侧链巯基的化学反应；氨基酸紫外吸收；纸层析和离子交换层析分离分离氨基酸的原理；难点：纸层析和离子交换层析分离分离氨基酸的原理教学手段及教具：课堂讲授与PowerPoint演示相结合。讲授内容及时间分配：
复习：5分
第一节氨基酸
四、氨基酸的化学反应（15分）
五、氨基酸的光学活性和光谱性质（15分）
六、氨基酸混合物的分析分离（20分）
第三节肽（30分）
一、肽
二、生物活性肽
小结：5分课后作业1.α-氨基酸的烃基化反应常用的二种试剂是？氨基酸自动分析仪依据哪种反应原理设计？
2.α-氨基酸的茚三酮反应呈现的颜色是否都一样？
3.米伦反应、坂口反应和Pauly反应是哪些氨基酸侧链的反应？
4.半胱氨酸的巯基都有哪些反应？常用的打开二硫键的氧化剂和还原剂是什么？
5.哪三种氨基酸在280nm紫外光下有吸收峰？原因是？紫外吸收法测定蛋白质浓度的理论依据是？
6.氨基酸纸层析、离子交换层析的原理？
肽键及肽键的特点
2.天然生物活性肽及结构特点
3.谷胱苷肽结构特点及生物功能、抗菌肽
4.蛋白质一级结构及序列测定步骤
5.二硫键的打开方法及肽链分离方法
书后79页习题：1，2参考资料《蛋白质分子基础》高教出版社第二版陶慰孙等
《生物化学与分子生物学》科学出版社王联结第二版
《普通生物化学》高等教育出版社郑集第三版
《生物化学解题指导与测验》高等教育出版社张楚富注：本页为每次课教案首页
第四章蛋白质化学(protein)
第一节概述
第二节蛋白质的基本单位—氨基酸
第三节肽
第四节蛋白质的分子结构
第五节蛋白质的性质
第六节蛋白质及氨基酸的分离纯化与测定
第三节肽
一、肽
二、生物活性肽

一、肽
肽是氨基酸的线性聚合物。
肽的获得

1.肽的结构
肽键的特点
肽平面、肽单位、二面角
多肽中的二硫键

2.肽与氨基酸的性质区别
肽的酸碱性质
氨基酸无双缩脲反应，肽有
天然存在的重要多肽
以蛋白质形式存在:
以天然活性肽形式存在：

二、生物活性肽(Naturalpeptide)
1.谷胱甘肽：γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸
谷胱甘肽重要的生物功能

2.神经肽
主要存在于中枢神经系统的一类活性肽。
①脑啡肽（五肽）
②内啡肽

3.抗菌肽(是一种抗生素)
①青霉素
②短杆菌肽（10肽）
③放线菌素
其它活性肽
肽的应用及发展

第四节蛋白质的分子结构
构象（conformation）
蛋白质结构的不同组织层次（20世纪50年代）

一、蛋白质的一级结构（平面结构、化学结构、共价结构）
1.概念：
书写方式：Ala.Lys.GlyLSTI
2.一级结构的测定（测序）
步骤
第一步：测定蛋白质分子中多肽链的数目
第二步：拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键
借助非共价相互作用缔合的
通过共价二硫桥（－S－S－）交联的肽链
分离、纯化多肽链：电泳、层析等方法。
①还原法：二硫键的断裂
为防止巯基重新氧化，可用碘乙酸、碘乙酰胺等使其烷化
②氧化法：二硫键的断裂
二硫键用过甲酸氧化为磺酸基而拆开

第三步：分析每一多肽链的氨基酸组成
第四步：测定多肽链的氨基酸序列
N－末端氨基酸测定
C－末端分析
多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化
（1）肽链末端分析
①N-末端分析
二硝基氟苯法（FDNB法）
二甲基氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法）
异硫氰酸苯酯法（Edman法）
氨肽酶法
②C－末端分析
肼解法
羧肽酶法
③多肽链部分裂解和肽段混合物的分离纯化
要求：选用专一性强的、断裂点少的、反应产率高的蛋白水解酶或化学试剂进行有控制的裂解。后将所得混合物进行分离纯化。经N未端和C未端测定，确定出每一肽段的序列。
酶解法（表现出专一性）
化学法

第五步：确定肽段在多肽链中的次序
所得资料：N－末端残基HC－末端残基S
第一套肽段OUSPSEOVERLAHOWT
第二套肽段SEOWTOUVERLAPSHO
借助重叠肽确定肽段次序：
HOWTOUSEOVERLAPS
第六步：确定原多肽链中二硫键的位置
采用胃蛋白酶：专一性低，切点多。肽段比较小，分离、鉴定比较容易。作用pH在酸性范围。
肽段混合物进行的对角线电泳
对角线电泳
巯基的保护
例：有一个A肽？
①酸水解得到：Ala、Arg、Ser、Glu、Phe、Met；
②当A肽与FDNB试剂反应后得：DNP-Al