实验八 高效液相色谱柱效能的测定.doc

实验八高效液相色谱柱效能的测定
一、目的要求
（1）学习高效液相色谱柱效能的的测定方法；
（2）了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，初步学习操作方法。
二、实验原理
对色谱体系，色谱柱的柱效能，可以定量地用理论塔板数N来表示：

速率理论及范弟姆特方程式对于研究影响高效液相色谱柱效的各种因素，同样具有指导意义：
由于组分在液体中的扩散系数很小，纵向扩散项（）对色谱峰扩展的影响可以忽略，而传质阻力项Cu则成为影响柱效的主要因素。因此，提高柱内填料装的均匀性和减小粒度，以加快传质速率，可以提高柱效能。除上述因素以外，还应考虑一些柱外展宽的因素，其中包括进样器的死体积和进样技术等所引起的柱前展宽，以及由柱后联结管、检测器流通池体积所引起的柱后展宽。
三、仪器与试剂
1.仪器岛津LC-10A(Shimadzu,Japan)高效液相色谱仪，SPD-10A紫外可见波长检测器和SCL-10ASP色谱数据处理器(日本岛津公司)。超声波清洗器
2.试剂甲苯、萘、联苯、甲醇（色谱醇）、正已烷（A.R）.
标准溶液配制
（1）甲苯标准储备液(1.0000gL-1)准确称取0.0100ｇ甲苯,在10mL容量瓶中用正己烷定容。
（2）萘标准储备液(1.0000gL-1)准确称取0.0100ｇ萘，溶于正己烷中，在10mL容量瓶中用正己烷定容。
（3）联苯标准储备液(1.0000gL-1)准确称取0.0100ｇ联苯，溶于正己烷中，在10mL容量瓶中用正己烷定容。
（4）甲苯标准使用液(100mgL-1)吸取上述甲苯标准储备液1.0mL，于10mL容量瓶中用正己烷定容。
（5）萘标准使用液(100mgL-1)吸取上述萘标准储备液1.0mL，于10mL容量瓶中用正己烷定容。
（6）联苯标准使用液(100mgL-1)吸取上述联苯标准储备液1.0mL，于10mL容量瓶中用正己烷定容。
四、实验步骤
1、色谱操作条件
（1）色谱柱C-18250mm×4.6mmi.d；硅胶粒径5m。
（2）流动相甲醇：水（955），流量0.5mL/min。
（3）紫外检测器测定波长=254nm
（4）进样量20L
2、色谱测定
（1）将流动相于超声波清洗器上，脱气15min；
（2）按仪器操作步骤调节仪器至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡，仪器基线噪音最小时，即可进样。
（3）吸取20L标准使用液进样，记录色谱图，重复进样两次。
五、数据处理
1、记录实验条件
（１）色谱柱
（２）流动相及流量
（３）检测器
（４）进样量
2、测量各色谱图中甲苯、萘、联苯等的保留时间tR及色谱峰的半峰宽Y1/2，计算各对应理论塔板数N。
组分次数tR/minY1/2/minN／块.m-1
甲苯１２平均
萘１２平均
联苯１２平均六、思考题：
（1）、由本实验计算所得的各组分理论塔板数说明什么？
（2）、紫外光度检测器是否使用于检测所有的有机化合物，为什么？
（3）、若实验获得的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？