玉米衰老相关蛋白基因ZmSAP的克隆与表达分析.pdf

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玉米衰老相关蛋白基因乙mS4尸的克隆与表达分析Mao-jun2，PAN张志明”，刘丽坤，王静1，赵茂俊2，潘光堂H10．38．The个氨基酸。相对分子量为21．92妨，等电点为10．38。该氨基酸序列与豌豆、挪威云杉、寄生藻等有不同程度的同源性且在gene(ZmSAP)in。associatedmaizeLil，WANG625014，China)reaction(RT—PCR)andends(RACE)werebandedbp(GenBankmumber：GU253311)，whichananddeducedMicromonaslocated478，andprogrammedrelated收稿13期：2009—12-30；修回日期：2010拼一07植物病理学报40(4)：373-380(2010)摘要：利用立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)诱导胁迫下玉米高耐纹枯病自交系幼苗叶片所构建的cDNA文库中获得的EST序列，通过电子克隆和RT．PCR方法，结合eDNA末端快速扩增技术，从玉米叶片中分离克隆到衰老相关蛋白基因的全长cDNA序列，命名为ZmSAP(GenBank登录号：GU253311)。序列分析表明，ZmSAP全长lbp，包含一个完整的bp的开放阅读框(ORF)，具有连续的P0lyA尾和典型的加尾信号AATTAA。ProtParam程序预测表明该基因编码200不同物种间具有一个保守结构域，染色体定位发现该基因位于玉米第l条染色体上。荧光定量PCR分析表明，在高耐纹枯病自交系R15和高感纹枯病材料478中ZmSAP基因在病菌胁迫初期呈诱导表达，可能参与了病原菌诱导的细胞程序性死亡过程，说明该基因与纹枯病菌胁迫响应机制密切相关。关键词：玉米；纹枯病；衰老相关蛋白；基因克隆；实时荧光定量PCRCloningcharacterizationofproteinducedbyRhizoctoniasolan，in(1chuanlengthflameWaspusilla．ChromosomeI．More—real—timeS1NICA(1四川农业大学玉米研究所，教育部作物基因资源与遗传改良重点实验室，雅安625014；2四川农业大学生命科学与理学院，雅安625014)aZHANGZhi．min91，LIUJin91，ZHAOGuang—tan91MaizeImprovementMinistryDepartmentAbstract：Silicocloning，reversetranscription—polymerasechainrapidamplificationcDNAappliedincloningthesenescence—associatedgenewithESTsobtainedfromsolaniinducedleafeDNAlibraryR15highresistantsheathblightbasis．Thefullis1156sioncontainsopenreading603bp，a5untranslatedregion287bp3’untranslated266bp，andnamedZmSAP．ZmSAPhascontinuouspolyAtypi—calpolyadenylationsignalputativelyencodes200aminoacid，withpredictedmolecularweight21．92kDisoelectricpointhomologyanalysisindicatedthatami’acidsequencemaysL．sharesdifferentthosePisumsativum，Piceaabieslocationrevealedthischromosomeover，transcriptZmSAPR．solaniwasexaminedPCR．ItshownexpressionbotllmaterialsusceptiblelinemaybeinvolvedcelldeathresponseR．solani．Theexperi—mentalresultscloselymaize．基金项目：国家自然科学基金(30900901)；高产转基因玉米新品种培育(2008zx08003-003)；四川省科技厅应用基础项目(2006J13·039)；四川省教育厅重点项目(07ZA063)通讯作者：潘光堂，教授。博士，主要从事玉米遗传育种研究；电话：[phone]，E—mail：[e-mail]第一作者：张志明(1979一)，男，山东人，主要从事玉米分子育种研究；E—mail：[e-mail]．c