实验三 穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离与鉴定.doc

实验三穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离与鉴定
一、概述
穿山龙为薯蓣科穿龙薯蓣（DioscoreanipponicaMakino）的干燥根茎。具有活血化瘀、祛风除湿、清肺化痰等功效。
穿山龙中主要化学成分的结构及物理性质：
薯蓣皂苷（dioscin）为无定形粉未或针状结晶，mp275～277℃。可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。
薯蓣皂苷元（diosgenin）为白色粉末，mp204～207℃，-129。（C＝1.4三氯甲烷）。可溶于有机溶剂及醋酸中，不溶于水。

薯蓣皂苷元D－葡萄糖L－鼠李糖
薯蓣皂苷
二、实验部分
（一）实验目的要求
1、掌握穿山龙中薯蓣皂苷元的提取和精制方法。
2、熟悉薯蓣皂苷及皂苷元的性质和检识方法。
（二）实验原理
薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。
（三）实验药材、仪器与试剂
1、药材：穿山龙粗粉70g（每组）
2、仪器：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、纱布、乳钵、PH试纸、烘箱、试管、水浴锅、索氏提取器等。
3、试剂:浓H2SO4、Na2CO3粉末、蒸馏水、95%乙醇、1%磷钼酸乙醇溶液、石油醚（60-90℃）、醋酐、浓硫酸、三氯甲烷、浓硫酸等。
（三）实验内容
1、薯蓣皂苷元的提取、分离和精制
穿山龙粗粉（70g）
置圆底烧瓶中，加水350ml、浓H2SO430ml，
室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时，
放冷，倾出酸水液
酸性药渣
用清水反复漂洗除去余酸，然后将药渣倒入
乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研
磨调PH至中性（用PH试纸测试）、水洗、抽干
中性药渣
低温（80℃）干燥12小时

干燥药渣
置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，
以石油醚（60-90℃）150ml为溶剂，连
续回流提取4-5小时

石油醚提取液
回收石油醚至剩10-15ml，迅速倾入
小烧瓶中、密盖，置于冰箱中析晶（48h），抽滤

滤液沉淀
用少量冷石油醚洗二次，抽干
薯蓣皂苷元粗品
置圆底烧瓶中，加50ml甲醇，在沸水浴上加热回流至完全溶解，趁热抽滤，滤液放入冰箱析晶。
薯蓣皂苷元精品
2、鉴定
（1）检识反应
①醋酐－浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）
取样品适量，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，观察并记录现象。
②三氯甲烷－浓硫酸反应（Salkowski反应）
取样品适量，加三氯甲烷1ml使溶解，沿试管壁加等量的浓硫酸，分别置可见光及紫外灯下，观察并记录现象。
（2）薄层色谱鉴定
吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板
样品：1%自制薯蓣皂苷元的乙醇液
对照品：1%薯蓣皂苷元标准品的乙醇液
展开剂：苯-乙酸乙酯（8:2）
显色剂：1%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
（四）实验指导及注意事项
1．原料经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时炭化。
2．在干燥水解原料的过程中，应注意压散团块和勤翻动，以利快干。
3．在连续回流提取过程中，由于使用的石油醚极易挥发损失，故水浴温度不宜过高，能使石油醚微沸即可。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。
4．回收石油醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增加至高虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回收，取下提取器，将其中石油醚移置另外容器中，如此反复操作，即可完成回收石油醚的操作。
5．在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液数滴，滴于白瓷皿中，挥散溶剂，观察有无残留物，然后进行醋酐－浓硫酸反应。若反应呈阴性，示已提尽。
（五）思考题
1．甾体皂苷可用哪些反应进行鉴定？
2．试设计一种从穿山龙中提取薯蓣皂苷的工艺流程，并说明提取、分离原理。
3．使用石油醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项？