实验六 人参中人参皂苷的提取分离及鉴定.doc

实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定

人参为五加科植物人参(PanaxginsengC.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。
人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3等50余种人参皂苷。
根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型-A型，②人参三醇型-B型，③齐墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolicacid)。

[目的要求]
1.通过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分离和检识方法。
2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。
[实验原理]
人参的主要成分为人参皂苷，总皂苷含量约4％，人参皂苷大多数是白色无定形粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。人参皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大量的泡沫。人参总皂苷无溶血作用，分离后，B型和c型人参皂苷有显著的溶血作用，而A型人参皂苷有抗溶血作用。
人参中除含有皂苷外，还含有脂溶性成分如挥发油，脂肪、甾体化合物及大量的糖类等，这些类成分对人参皂苷的分离和精制有干扰，所以必须除去，方可得到纯度较高的皂苷。
本实验以人参根为原料提取分离人参总皂苷，利用人参总皂苷易溶于甲醇，不溶于乙醚性质采用溶剂法进行初步提取去杂；然后根据皂苷在含水丁醇中有较好的溶解度的性质采用萃取法进行分离；再用沉淀法或大孔吸附树脂法进行进一步分离精制；对提出的总皂苷采用检测三萜类化合物通性的理化检识方法——泡沫试验及显色反应进行初步定性检识；最后根据人参总皂苷中各单体皂苷分子结构中糖基个数和羟基数不同而极性大小不同的性质，通过薄层色谱法对人参总皂苷进一步分离和专属定性检识。

[实验内容]
人参总皂苷的提取分离
任选一种方案
方案(1)
人参根粗粉（60目10g）
用滤纸筒包好，置索氏提取器中，
加甲醇加热回流提取至三氯化锑氯仿饱和溶液反应呈阴性，

提取液
减压回收甲醇

浸膏
用10倍量蒸馏水溶解
水溶液
用乙醚在分液漏斗中，
振摇脱脂4次

乙醚液（脂类）水层
用水饱和的正丁醇萃取6次，
合并
正丁醇液
减压回收正丁醇，蒸干
残留物（总皂苷粗品）
方案(2)
人参根粗粉（60目10g）
用滤纸筒包好，置索氏提取器中，
加10倍量乙醚回流脱脂至无色，

乙醚液（脂类）残渣
加甲醇加热回流提取至三氯化锑氯仿饱和溶液反应呈阴性
甲醇提取液
减压回收甲醇
浸膏
用10倍量蒸馏水溶解
水溶液
用水饱和的正丁醇萃取6次，合并
正丁醇液
减压回收正丁醇，蒸干
残留物（总皂苷粗品）

二、人参总皂苷的分离精制
将人参总皂苷粗品分为两份
方法（1）沉淀法
1份总皂苷粗品
甲醇溶解，倾入约10倍量丙酮，
不断搅拌，析出

黄白色沉淀母液
过滤回收溶剂，用少量甲醇溶解，再倾入约10倍量丙酮
总皂苷黄白色沉淀
过滤
总皂苷
合并，减压60℃下真空干燥，称重计算收率
精制总皂苷
方法（2）大孔树脂柱色谱法
大孔树脂色谱是近年来用于分离和富集天然化合物的一种常用方法，应用大孔树脂分离皂苷，主要用于皂苷的富集和初步分离。将含有皂苷的水溶液通过大孔树脂柱吸附后，先用水洗脱除去糖和其他水溶性杂质，然后改用不同浓度的甲醇或乙醇进行梯度洗脱。极性大的皂苷可被低浓度的甲醇或乙醇洗脱下来，极性小的皂苷则被高浓度的甲醇或乙醇洗脱下来。
1份总皂苷粗品
用少量水溶解，加样于处理好的D101型大孔树脂柱上，
吸附1小时后，用3倍柱体积蒸馏水洗脱除杂质
继用60%乙醇洗脱至三氯化锑氯仿饱和溶液反应呈阴性
洗脱液
减压回收溶剂
残留物
减压60℃下真空干燥，称重计算收率