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食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项--

食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项
食用菌菌种分离的方法和操作步骤
菌种分离即是进行食用菌菌丝纯化的过程，它是制种工作的重要
环节，通俗地讲就是把食用菌菌丝从自然中单独分离出来进行纯培养，
从而获得纯食用菌菌丝的过程。菌种分离是一项重要而又细致的工作，
每个环节都必须严格按照无菌操作规程进行。食用菌的分离方法很多，
常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。
1.组织分离法
组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养
的方法。其特点：一是属于无性繁殖，能够保持原有菌种的优良特性，
是生产中获得纯菌种的常用方法，且简单易行，取材广泛，菌丝萌发
快。二是组织分离操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。但
对银耳、黑木耳等胶质菌因其子实体种菌丝极少，如用组织分离培养，
则往往不易成功。
1.1子实体分离种菇要选择朵大盖厚、柄短、八九分成熟的优
良品种。切去菇体基部，在超净工作台用75%的酒精棉球进行擦拭菌
盖与菌柄两次，进行表面消毒。接种时，只要将种菇撕开，用消毒后
的小刀在菌柄与菌盖的交界处切取一小块组织，再用接种针将组织块
放入PDA培养基的试管斜面中间。置于24℃温度下培养3-5天就可
以看到组织块上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、
平菇等可以使用此方法。
1.2菌核组织分离茯苓、猪苓、雷丸等食用菌的子实体不易采
集。而常见的是它储藏营养的菌核。用菌核分离，同样可以获得菌种。
方法是将菌核表面洗净，用酒精消毒，切开菌核，取中间组织一小块，
约黄豆大小，接种在PDA培养基斜面上，在24℃下培养，产生菌丝
后进行分离纯化。应注意的是，菌核是储藏器官，大部分是多糖类杂
质，只有少量的菌丝，因此挑选的组织块要大一些，如果组织块过小，
则不易分离出菌种。
1.3菌索分离法菌索分离常用于蜜环菌分离。方法是选新鲜的
活菌索，用75%酒精棉球将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓
部分用无菌剪刀切成小段，接入PDA斜面培养基上，在24℃下培养，
有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。
2.孢子分离法
孢子分离法是利用成熟子实体的有性孢子能自动从子实体种弹射出

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食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项--

来的原理，在无菌操作条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发生长成
菌丝体而获得纯菌种的一种方法。这种菌种生活离强，但孢子个体之
间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇实验才能在生
产上应用。其特点一是属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培
育新品种。二是分离过程较复杂，适用于胶质类和小性伞菌。孢子分
离可分为单孢分离法和多孢分离法。
3.1单孢子分离：取单孢子接种在试管斜面培养基上，让它萌发
成菌丝体获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢子分离得到的菌丝有
结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢子分离生产上较少采用，
而且技术复杂，一般采用多孢子分离法。
3.2多孢子分离：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让他们
萌发、自由交配来获得纯菌种的方法。操作简单易学，生产上经常采
用，由于采集孢子的方法不同又可分为一下几种。
①采集器孢子弹射法采集孢子的装置可用玻璃钟罩或者玻璃
漏斗做成。蘑菇和香菇常用这种方法采集孢子。具体做法是：把玻璃
钟罩或漏斗，放在一个垫有几层纱布的瓷盘上，内放培养皿和不锈钢
支架，上端气孔用棉花塞住，然后用两层大纱布将整个装置包起来，
高压灭菌后，移入无菌室备用。分离时把选好的种菇，切去菌柄基部
送入无菌室用75%的酒精消毒1-2分钟后，用无菌水漂洗，除去表面
药液，再用无菌纱布擦手，并将其插到不锈钢支架上，静置1-2天，
菌褶上有大量孢子散落在培养基内，形成一层粉末状孢子印时，取下
种菇，用灭菌后的用灭菌后的注射器，吸取3~5mL无菌水，注入盛有
孢子的培养皿中，轻轻搅动，使孢子均匀地悬浮于水上，再将注射器
插上针头，吸取沉于底部的饱满孢子，注1~2滴悬液于试管斜面培养
基，并使其均匀分布于培养基表面。或用接种环挑取少量的孢子直接
在斜面培养基上画线。待抱子萌发，生成菌落时，选孢子萌发快，生
长良好的菌落，移接到新的斜面培养基上培养。
②三角瓶悬挂法银耳、黑木耳常用此法采集孢子。以银耳为例，
其具体做法如下:选朵大、雪白、无病虫害的新鲜银耳作为种耳，用
75%的酒精棉球擦拭子实体表面，经无菌水冲洗种耳数次后，用无菌
滤纸把种耳表面的水分吸干。用火菌刀把种耳切成一小块，以入瓶后
不会碰到瓶壁为度，挂在用火焰灭菌过的小金属钩(或不锈钢钩)上，
迅速悬挂在三角瓶内，注意勿使种耳接触到培养基，以防杂菌污染。
塞上棉塞，放在20~25℃条件下，经1~2d，就可看到