葱种植试验Microsoft Word 文档.doc

探究葱生长对干旱环境的响应
一研究目的
水资源不足已经成为世界主要的农业产区都存在的问题[1],我国作为一个缺水的国家，干旱不仅制约着经济的发展，同时还导致了一系列的环境生态问题[2]干旱作为一种主要的非生物胁迫因子，它限制着农作物的生长，因此研究植物的抗旱性对植物学的研究以及农业生产都有着重要的指导意义。
葱在东亚国家以及各处华人地区中，常作为一种很普遍的香料调味品或蔬菜食用，在人们的饮食生活中占有一部分的地位，它的生长受到各种因素的影响，水分因子是葱生长环境最易改变也最易人为控制的因子，在胁迫状态下保持最佳的水分状态对葱生长是至关重要的。葱的最终产量来源于光能的截获和同化以及光合产物在体内的分配，结合现有的试验条件我们通过观察测量种子的萌发率，根的长度、颜色变化，叶子气孔的大小和数量，叶子的颜色、枯败，以及测量植株体内的可溶性糖，脯氨酸，叶绿素a,叶绿素b的含量，丙二醛的含量来了解干旱对葱生长的影响。
本研究通过溶液培养试验设置不同程度的干旱探究对葱的生长过程中的生理生化以及形态的影响，以便为葱的种植提供一定试验依据。
三试验材料
种子：葱
实验仪器：直尺，放大镜，培养箱，可见光分光光度计；低速离心机；恒温水浴锅；旋涡仪；天平；剪刀；漏斗；研钵；培养皿（21个）烧杯；移液管；容量瓶；具塞试管；人造沸石；显微镜；
实验试剂：冰醋酸；甲苯，3%磺基水杨酸；0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L甘露醇；标准的脯氨酸溶液；酸性茚三酮试剂；活性炭；乙醇；葡萄糖标准液；蒽酮试剂
*试剂的配制：10.3mol/L甘露醇：54.65g甘露醇溶于1000ml的蒸馏水；
2标准的脯氨酸溶液：10㎎脯氨酸溶于100ml80%乙醇中，质量浓度为100微克每毫升；
3酸性茚三酮试剂：2.5g的茚三酮置于60ml冰醋酸和40ml6mol/L磷酸，加热（70℃）溶解，试剂24h内稳定；
4葡萄糖标准液：称取已经在80℃烘箱中烘至恒重的的葡萄糖100mg，用80%乙醇配制成1000ml溶液，即得每ml含糖100微克的标准溶液
5蒽酮试剂：称取1g蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸（将760ml相对密度为1.84的浓硫酸用蒸馏水稀释到1000ml）溶液，置于棕色的瓶子里面，当日配置使用。
四实验原理
在实验过程中采用蒽酮法测量可溶性糖的含量，糖在浓硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮反应形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关，在625nm波长下的OD值与糖的含量成正比。在酸性和高温的条件下，丙二醛可与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成棕红色的3,5,5-三甲基噁唑-2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应会受到可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但是最大的吸收波在450nm处，采用双组分光光度法可分别求出MDA和可溶性糖的含量。
五试验步骤
1.在7个培养皿中分别放入10ml不同浓度的甘露醇溶液（使得
滤纸浸湿）并编号，试验设置5个平行（A、B、C、D、E）（见图表1）；
2取葱的种子播于铺有湿滤纸的培养皿中培养并将其置于4℃培养箱。分别在不同浓度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0nol/L）的培养基（底部放有滤纸）放入20粒种子，胚根突破种皮视为萌发，观察种子的萌发率；（A组用于观察和测量根的长度，其它4组进行后续试验）[3]
3.在种子生长的过程中观察植株的生长状况（叶子的颜色，植株的高矮，根的长度，颜色），并一一记录，每隔3天记录一次，每隔5天加一次培养液，20天后每隔3天采取每个培养皿中植株相同部位的叶子进行显微观察比较它们的气孔的大小和多少以及脯氨酸、叶绿素a,叶绿素b的含量，可溶性糖以及丙二醛；（试验方法见下文）

甘露醇浓
度（mol/l）
组别00.10.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
ABCDE
图（1）
（一）脯氨酸含量的测定【4】【5】
取地上部（芽鞘和叶子）0.5g，用3%磺基水杨酸5ml研磨提取，匀浆移入离心管中，在沸水中提取10mim，冷却后，3000r/mim离心10mim，取上清液待测；
制作标准曲线：用100微克每毫升脯氨酸配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10微克每毫升的标准溶液，取标准溶液各2ml，加2ml3%磺基水杨酸、2ml冰醋酸和4ml2.5%酸性茚三酮试剂于具塞试管中，置于费水浴中显色1h，冷去后加入4ml的甲苯，盖好盖子于旋涡混合仪上振荡0.5mim，静置分层，吸取红色的甲苯相，于波长520nm处测定OD值，以OD值作为纵坐标，脯氨酸质量浓度（微克每毫升）为横坐标绘制标准曲线图
各取2ml上清液，分别加入2ml蒸馏水，2ml冰醋酸，4ml2.5%酸性茚三酮试剂，与