叶绿素含量的测定.docx

植物生理学实验

叶绿体色素含量的测定
----分光光度法

姓名

学号

系别

班级

实验日期

同组姓名

摘要:
叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度。叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。叶绿体色素95％乙醇提取液中叶绿素a和b及类胡萝卜素分别在665nm,649nm和470nm波长下具有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素乙醇提取液中叶绿素a和b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。
实验原理与实验目的
实验原理：
利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm、649nm和470nm。
根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。
实验目的：
掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。
实验材料和方法
植物材料：菠菜叶片、番茄幼苗叶片
实验用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等
实验试剂：95%乙醇、石英砂和碳酸钙
试验方法：分光光度法
实验步骤
叶绿体色素的提取
取新鲜菠菜叶片（或番茄幼苗叶片）0.5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆,再加95%乙醇10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml。
2、吸光度的测定
取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长665、649和470nm下测定吸光度。
3、结果计算
依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。
附录：722分光光度计的使用
1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开样品室盖，打开电源开关预热20min。
2、打开样品室盖，将测定旋纽调至T（透光度），用调节旋纽0调0；盖上样品室盖，用调节旋纽100调100。
3、将空白样品放入样品槽，按上述方法调0和调100。
4、将测定旋纽调至A（吸光度），用Abs旋纽调0，测定待测样品的光密度。
计算公式：
95%乙醇提取液中色素浓度的计算
Ca（叶绿素a）=13.95A665–6.8A649
Cb（叶绿素b）=24.96A649–7.32A665
CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649+6.63A665
Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470–2.05Ca-114.8Cb)/248

叶绿体色素含量=

实验结果与讨论
1、菠菜叶片不同波长下的吸光度(0.42g)
波长（nm）吸光度平均值6650.7020.6830.7550.71336490.3280.3260.3400.33134700.8230.8270.8610.8370
Ca（叶绿素a）=13.95*0.7133–6.8*0.3313=7.6977mg/L
Cb（叶绿素b）=24.96*0.3313–7.32*0.7133=3.0479mg/L
CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16*0.3313+6.63*0.7133=10.7456mg/L
Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470–2.05Ca-114.8Cb)/248=1.8995mg/L

Ca（叶绿素a）含量=7.6977mg/L*0.05L*1/0.42g=91.64mg/g
Cb（叶绿素b）含量=3.0479mg/L*0.05L*1/0.42g=36.28mg/g
Cx.c（类胡萝卜素）含量=1.8995mg/L*0.05L*1/0.42g=22.61mg/g

2、1#番茄幼苗叶片不同波长下的吸光度(0.34g)
波长（nm）吸光度平均值6650.4630.4520.4530.45606490.2030.2640.2750.24734700.4920.4640.4790.4783
Ca（叶绿素a）=13.95*0.4560–6.8*0.2473=4.6796mg/L
Cb（叶绿素b）=24.96*0.2473–7.32*0.4560=2.8347mg/L
CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16*0.2473+6.63*0.4560=7.5142mg/L
Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470–2.05Ca-114.8Cb)/248=0.5778mg/L

Ca（叶绿素a）含量=4.6796mg/L*0.05L*1/0.34g=68.82mg/g
Cb（叶绿素b）含量=2