苯磺隆原药的HPLC检测.doc

苯磺隆质量分数的测定
方法提要
试样用乙腈+水+氨水（2+3）=500+500+0.4（V/V）溶解，以甲醇+水+乙酸=70+30+0.1（V/V）为流动相，使用以HypersilODS为填充物的不锈钢柱和具有可变波长紫外检测，对试样中苯磺隆进行高效液相色谱分离和测定，外标法定量。
试剂和溶液
甲醇：色谱级；
水：新蒸二次蒸馏水；
乙酸；
氨水；
苯磺隆标样：已知质量分数，≥98.0%。
仪器
高效液相色谱仪：具有可变波长紫外检测器；
色谱柱：200mm×4.6mm（id）不锈钢柱，内装HypersilODS填充物，粒径5μm；
色谱数据处理机；
超声波发生器；
进样器：25μL。
高效液相色谱操作条件
流动相：甲醇+水+乙酸=70+30+0.1（V/V）；
流量：0.5mL/min；
柱温：室温；
检测波长：254nm；
进样量：20μL；
保留时间：苯磺隆7.50min。
上述操作条件系典型操作参数，可根据仪器特点，对给定操作参数作适当调整，以获得最佳效果。苯磺隆标样高效液相色谱图见图1、典型的苯磺隆原药高效液相色谱图见图2。

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1—苯磺隆1—苯磺隆
图1苯磺隆标样高效液相色谱图图2苯磺隆原药高效液相色谱图
测定步骤
标样溶液的配制
称取标样0.1g(精确到0.0002g)置于250mL容量瓶中，用乙腈+水+氨水（2+3）=500+500+0.4（V/V）溶解并稀释至刻度，摇匀。
试样溶液的配制
称取试样0.1g(精确到0.0002g)置于250mL容量瓶中，用乙腈+水+氨水（2+3）=500+500+0.4（V/V）溶解并稀释至刻度，摇匀。
测定
在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针响应值，待相邻两针的响应值相对变化小于1.2，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中苯磺隆的峰面积分别进行平均，试样中苯磺隆质量分数X1（%）按式（1）计算：
A2.m1.P
X1=-----------------------------------（1）
A1.m2

式中：
A1—标样溶液中苯磺隆峰面积的平均值；
A2—试样溶液中苯磺隆峰面积的平均值；
m1—标样的质量，单位为克（g）；
m2—试样的质量，单位为克（g）；
P—标样中苯磺隆的质量分数，%。