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基因治疗
回答如下几个问题:
什么叫基因治疗？
Whatisgenetherapy?
基因是如何传递的？
Howaregenesdelivered?
哪些疾病可用基因治疗？
Whichdiseasescanbetreated?
临床试验的最新情况？
Whatisthestatusofcurrentclinicaltrails?
基因治疗的前景如何？
Whatarethefutureprospects?

第一节概述
1.基因治疗的概念
一般是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以最终达到预防或改变特殊疾病状态为目的的治疗方法。
基因治疗（Genetherapy）：指应用DNA重组技术，将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。

2.基因治疗的主要策略
基因置换（genereplacement)或称基因矫正（genecorrection）：特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组，让导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因，不涉及基因组的任何改变。
基因添加或称基因增补（geneangmentation）：通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。
基因干预（geneinterference）：采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。

基因置换或基因添加的必要条件
对导入的基因及其产物有详尽的了解
外来基因能有效地导入靶细胞
导入基因能在靶细胞中长期稳定驻留
导入基因能有适度水平的表达
基因导入的方法及所用载体对宿主细胞安全无害

导入自杀基因－－细胞自杀效应
将自杀基因转移入宿主细胞中，该基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞“自杀”，清除肿瘤细胞。

基因修饰－－改变细胞功能
基因修饰肿瘤细胞的“疫苗”疗法
基因修饰TIL的过继免疫方法
免疫增强基因疗法
原位修饰肿瘤免疫原性的基因疗法

基因标记（genelabeling）：基因标记实验是基因治疗的前奏，并不在于直接治疗疾病而是期望能够提供有关正常细胞生物学和疾病病理方面的信息。

基因治疗步骤
基因导入（administration）：把基因或把含有基因的载体导入机体。
基因传递（delivery）：基因从导入部位进入靶细胞核。
基因表达（expression）：细胞中治疗性基因产物的形成。

第二节基因转移技术和靶细胞

1.基因治疗方式
基因治疗的基本方式：
体内直接转基因
体内法invivo
体细胞介导的基因治疗
回体法exvivo

基因转移的方法：
生物学方法
逆转录病毒载体，腺病毒载体，腺病毒相关病毒载体，单纯疱疹病毒载体
非生物学方法
脂质体，直接注射，受体介导基因转移技术，其它方法

基因治疗载体
载体是治疗性遗传物质的携带者或运输工具。
载体的类型：病毒载体，非病毒载体

理想的基因治疗载体具备的性质
易于进入靶细胞。
在特异细胞或组织达到有规律、充分及持续的外源基因表达。
外源基因应含或整合于基因组活化区内或能自主复制的构件。
整个过程应安全有效并具有选择性。
易于大量生产。

基因治疗载体的选择（考虑因素）
靶细胞或靶组织
疾病类型
期望是否持续或短暂表达
所要求的基因表达水平
体内或回体基因治疗
安全性：风险效应比。

基因转移的生物学方法
病毒载体类型
重组型病毒载体:以完整的病毒基因组为改造对象，选择性删除病毒的某些必需基因（早期基因、控制表达的基因），缺失的功能由互补细胞反式提供；利用同源重组方法将适当长度的外源基因插入病毒基因组的非必需区,不改变病毒复制和包装所需的顺式元件。
无病毒基因的病毒载体：由载体质粒和辅助系统组成。载体质粒：由外源基因表达盒、病毒复制和包装所必需的顺式作用元件及质粒骨架组成；辅助系统：由病毒复制和包装所必需的反式作用元件组成
逆转录病毒载体
优点：高效地感染分裂的宿主细胞（100%）；在感染后，逆转录病毒能够将前病毒基因组稳定地整合到宿主基因组的随机位点上；利用重组逆转录病毒能将目的DNA传递给整个细胞群体；逆转录病毒载体可感染多种人和动物的细胞，宿主范围非常广；不产生任何有免疫原性的病毒蛋白，对宿主细胞无毒性作用，可建立细胞系长期持续表达外源基因。
缺点：只能整合至分裂相的细胞；容量小（不超10kb)；病毒滴度不高；由于其随机整合，有激活癌基因的潜在危险。

逆转录病毒的生活周期
进入宿主细胞双链RNA
逆转录酶
双链DNA前病毒
整合到宿主细胞基因组DNA中
宿主细胞RNA聚合酶II
mRNA
病毒RNA基因组作为合成相应
病毒蛋白质的模板

包装成新的病毒颗粒，离开宿主

腺病毒载体
优点：转染效率高、安全；宿主范围广，与细胞分裂无关；容量大，制备较易，病毒滴度较高。
缺点